文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
人肝细胞膜蛋白MRP3(3)在阻塞性胆汁淤积肝组织中表达
变化及其调节机制
姓名:柴进
申请学位级别:硕士
专业:内科学(消化系病)
指导教师:陈文生
20090501
人肝细胞膜蛋白谧枞缘ㄖ倩组织中表达变化以及调节机制摘要当胆汁淤积发生时,肝脏基因扛誂转录表达与核受体琑背景与目的:肝脏是胆酸合成、分泌、胆汁形成及其再循环Ω窝的重要器质如胆酸、胆红素和胆固醇在血液内异常堆积【】。而胆酸、胆红素等物质的排泄则主易澹且焕喾浅V匾5挠谢趵子转运蛋白,属于T颂宄易澹壳凹褐V辽儆种V饕7植加肝脏、肾脏、肠道等器官组织。的分子结构基本都包含跨膜区牒塑账结合域K堑闹饕9δ苁亲T似咸烟侨┧峤岷衔铩,硫酸盐、或某些抗表达很低或不表达【。但是在胆道结扎所致的急性胆汁淤积大鼠模型的肝脏中的表达量却非常高【俊M苯徊窖芯糠⑾衷谌死嗟ㄖ倩约膊如:胆道梗阻、原运功能研究进一步的深入,发现其转运底物与具有广泛的同源性,都能转运大部分胆酸,尤其是结合型胆酸,因此,的高表达被认为是代偿性的,以补偿小管面膜上的下调。所以,人们普遍认为的表达增高是在胆汁淤积状态下研究深入,有可能在不久的将来丌发出治疗胆汁淤积疾病的特效药物,并且对临床寻找肝胆汁淤积治疗对策也具重要的临床价值。,琍等基因相关。已经有文献报道,在体外细胞培养与胆道结扎的动物模型实验研究表明,核受体辏瑀能够上调/异二聚体则能够抑制的表达【。琍等也对的基因表达起官。胆汁淤积是指胆汁的生成和/或胆汁内溶质排出障碍,一些正常从胆汁中排泄的物要靠肝细胞膜上的胆酸转运蛋白系统,它们包括、鹊取其中,癌药物等等【俊多耐药相关蛋白琈是近年新克隆的一种转运蛋白基因,主要分布于肠道、肾脏及肾上腺,而在正常肝细胞基底侧膜上发性毛细胆管性肝硬化、甁综合征保琈诟蜗赴撞嗄け泶锪也大为增加,而同时肝细胞小管面的的表达量却急剧下降【俊K孀哦訫肝细胞的一种代偿性自我保护反应【】。因此,随着对调节的分子机制的进一步縍的表达【浚籖第三军医大学硕士学位论文—
枞缘ㄖ倩保ü齀实验研究对膜转运蛋白基因与核受体一定的调节作用‘】,但是其具体机制尚不清楚。而且目前的实验研究主要集中在体外细胞培养和动物模型实验,直接针对以“人”为研究对象的实验鲜有报道,人体组织的研究结果与体外细胞培养或动物实验常存在差异,如:用内毒素处理的大鼠的表达水平急剧下降,而当以“人’’为研究对象时例人体肝组织标本,对阻塞性胆汁淤积时上调相关的基因进行研究,从而进通过对收集的例标本分组哉兆椋赫8巫橹挥俚ㄗ椋河俚ǜ巫橹后,分化,以及与其调节相关核受体基因居隦泶锉浠Mü庖哂ü饧述基因在水平表达均显著增高,增高约倍左右。侧膜的表达明显增加。而谋泶铮诤四谟氚诰性黾印烁卧嘧枞缘ㄖ倩保ü齱白水平表达增高约丁、【、鲈诤四诒泶镌龈咴~叮欢诎冢烁卧嘧枞缘ㄖ倩保ü⑸保蜗赴底侧膜的表达却显著增高。同时,又由于转运底物与有着广泛的同源性,所以人们普遍认为的高表达是对的一种代偿,以减轻胆汁淤积的表达水平却维持不变,但是二者/蛋白水平的变化却均急剧降低【¨1臼笛橥ü占一步探讨与研究阻塞性胆汁淤积时人肝细胞膜转运蛋白的转录调控机制。方法别在水平与蛋白水平色觳夥治瞿ぷT说鞍譓泶锉测膜转运蛋白与核受体谡8斡胗俚ǜ巫橹谋泶镆约岸ㄎ磺榭觥Mü来检测基因启动子区反应元件与核受体岷匣钚栽谡8斡胗俚ǜ组织的变化。结果基因琑尽镜仍趍奖泶锝蟹治觯峁砻鳎篗约吧庖哂ü饧觳饨峁砻鳎枞缘ㄖ倩保ぷT说鞍譓诟蜗赴实验对膜转运蛋白基因与核受体基因镜仍诘鞍姿奖泶锝蟹治觯峁砻鳎蛋【显著增高约倍;【增高约倍,龈咴倍。讨论第二军医大学硕宦畚
时肝细胞受胆酸毒性损伤的程度,具有护肝的作用。因此,对表达调节的分子机制的研究,对寻找胆汁淤积治疗对策有着非常重要的临床意义。本实验通过对人体肝组织标本研究分析得知,阻塞性胆汁淤积时人肝细胞膜转运蛋白在肝细胞基底侧膜的表达量显著增高。基因启动子区反应元件与核受基因的转录表达功能。这与先前相关文献报道的体外细胞培养以及胆道结扎的胆汁淤积动物模型的实验结果相一致‘,,。而核受体觯琑宦凼窃趍水平还是蛋白水平均显著增高,这与文献报道的体外细胞培养以及胆道结扎的胆汁淤积动物模型的实验结果结果相反【俊S绕渲档米⒁獾氖牵耸芴宓鞍識诎的表达增高约倍,而在核内增高约叮庥隦在核内以及胞浆的表达增高的情况相反。这可能提示进入细胞核后,在某些因素的作用下,引起它由细胞核内向胞浆转移的核外转移现象,这需要进一步的研究证实。以上实验结果充分说明了人肝脏调节的分子机制与胆道结扎动物模型或体外细胞培养实验所建立的调节机制存在某些差异。另外,核受体蛋白,【、诎牒四诘姆布可能还存在差异,这可能提示其他