文档介绍：第二军医大学搏士论文
缩略词表
缩写英文全称中文全称
氨节青霉素
碱基对
小牛血清白蛋白
互补
细胞毒性淋巴细胞
氯化艳
培养基
二甲基亚矾
二硫苏糖醇
乙二胺四乙酸
胎牛血清
肝细胞癌
小时
千碱基对
千道尔顿
多克隆位点
小鼠白细胞介素
分钟
即感染复数
自然杀伤细胞
聚丙烯凝胶电泳
磷酸盐缓冲液
多聚酶链式反应
小鼠一干扰素
第二军医大学博士论文
溶液
第二军医大学博士论文
介导的肝癌细胞激活的淋巴细胞凋亡的双重阻断研究
中文摘要
肝癌是我国常见的恶性肿瘤,从二十世纪末开始已在我国恶性肿瘤死亡原因中
居第二位,其年死亡率为万。近年来,随着超、和等影像技术
的发展以及甲胎蛋白检测技术的普遍应用,肝癌的诊断水平有了很大的
提高。治疗手段也日趋多样化并形成了以手术为主的综合治疗方案,然而,多发
病灶和肝内转移是肝癌极其常见的现象,手术治疗时常难以彻底切除肿瘤组织,
难以达到根治的目的。还有一些病灶由于其大小或所处位置而不适合手术。同时
放、化疗的敏感性较低,毒副作用又常常对患者造成严重的损害,使患者的生存
质量下降,甚至威胁到生命,而且肿瘤细胞的耐药性也是影响疗效不可忽视的因
素。可见传统的治疗方法存在明显的局限性。主要原因是肝癌术后复发率很高,
大肝癌根治性切除术后年复发率约为,小肝癌亦达左右。目前缺乏有
效的抗复发措施,因此,研究发现新的肝癌术后抗复发措施对于提高肝癌治疗水
平具有重要意义。
肿瘤免疫治疗研究是倍受关注的研究课题,既往曾有大量应用非特异性免疫刺
激物质,细胞因子及临床应用的报道,但总体效果远
不理想。上述治疗仅能在一定程度上提高机体的非特异性免疫功能,缺乏对肿瘤
的特异杀伤机制的有效诱导。诱导机体特异性抗肿瘤免疫反应是近年研究的热
点。
细胞免疫在特异性抗肿瘤免疫反应中发挥主要作用,其中激活细胞是重要的
效应细胞,获得大量激活细胞是免疫治疗的关键。既往研究中,我们依据
细胞激活的多信号刺激原理,建立体外诱导肝癌细胞毒淋巴细胞方法,
既取手术切除的肝癌标本,分离肿瘤细胞和肿瘤浸润淋巴细胞,在体外将
肿瘤细胞与浸润淋巴细胞混合培养,加抗共刺激分子的交联作用,有效激
活细胞,虽然体内外均证实了较现有非特异性抗肿瘤作用存在优越性,但仍存
在体外难获得大量激活细胞和培养时间太长的问题,而且有部分标本体外激活
培养常常失败。即使培养成功,临床也只有少部分患者有明显疗效。上述问题是
我们在此课题中要解决和回答的问题,有关在肿瘤免疫作用的研究,
加深了对这些问题的认识。
为型膜蛋白。属受体家族成员,人淋巴细胞表达。现已证
第二军医大学博士论文
实,当淋巴细胞激活时,表达增加,对介导的细胞凋亡敏感性增加。
配体在正常淋巴细胞不表达,只有当淋巴细胞激活后表达。
结合后,可通过受体胞内区的死亡结构域向细胞传达凋亡信号,诱
导表达受体细胞凋亡,因此当激活细胞混合在一起时可诱导激活细胞凋
亡。这在正常机体作为机体免疫功能调节机制之一,防止免疫反应过强。而在体
外激活细胞培养时,大量激活丁细胞混在培养瓶内,激活细胞间可诱导自
身凋亡,影响大量获得有效激活细胞。我们设想加入可溶性受体,封闭激
活细胞表达的,使之不能与激活的细胞膜表面的受体结合,达到
阻断激活细胞凋亡的目的,从而获得大量激活细胞用于肝癌术后过继免疫
治疗,同时可使培养时间缩短,达到术后早期免疫辅助治疗的目的。
新近研究发现系统在肿瘤逃脱机体免疫机制中发挥作用,部分肿瘤
细胞表达,使该肿瘤细胞对激活淋巴细胞有反攻击作用,从而达到逃脱机
体免疫目的。肿瘤细胞表达,当激活细胞到肿瘤局部与肿瘤细胞接触,
由于自身表达,不但不能有效杀伤肿瘤细胞,反而肿瘤细胞表达与之
结合,从而诱导其自身凋亡,这就是肿瘤细胞对免疫细胞的反攻击作用。研
究证实部分肝脏的恶性肿瘤细胞表达,存在对淋巴细胞的反攻击作用。当
体外肝癌细胞与浸润淋巴细胞混合培养,共刺激使淋巴细胞特异激活时,不但
存在激活细胞间诱导介导细胞凋亡,还存在表达肝癌细胞对淋巴
细胞的反攻击,这可能是部分标本培养失败的原因,因此我们设想在肝癌细胞与
浸润淋巴细胞体外混合培养,联合共刺激分子激活过程中,加入可溶性受体,
不但能阻断激活细胞间诱导凋亡,还能达到封闭表达肝癌细胞对激活
细胞的反攻击作用。
肿瘤细胞表达对免疫细胞的反攻击作用不但在激活过程中可诱导激活
细胞凋亡,还可进一步影响激活细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。肿瘤细胞表达
,由于输入体外激活细胞时,不但不能