文档介绍：人头发毛囊组织DNA提取方法的研究
技术保障与研发部 魏宏泉
摘要 本研究以人头发的毛囊组织为材料，在动物组织总DNA提取的经典技术方案基础上，兼顾效率、成本和产率等三方面因素,对毛囊组织DNA提取方法进行了优化，，可以以少至一根带毛囊的头发为材料，在40分钟时间内获得约0。5mg组织DNA,其产量和质量可以满足基因检测工作后续流程的需要。同时，一次提取过程所耗药品试剂的成本约为0。3元,大大低于以微量血为材料的试剂盒提取法的成本。
在以RFLP法对线粒体12s rRNA基因1555位点进行基因检测的技术体系中，组织DNA提取是实验室工作的第一步，该工作的效率、质量、,我们确定了以微量血为材料提取组织DNA的技术方法,但为了使基因检测项目的实施具有更强的可操作性，设计多样化的组织样本采集形式则是必需的。为此，本研究以人头发毛囊组织为材料，旨在建立适用的取样方法和DNA提取方法的技术体系。
材料与方法
人头发毛囊组织
取自健康成年人。取样方法：用镊子夹住头发根部的部位,顺着毛发生长方向用力一拔即可，此时在毛发根部应明显可见白色或半透明的毛囊组织。然后用剪刀剪去大部分的毛干部分, Eppendorf管内。
试剂配制
Proteinase K
Proteinase K用去离子水溶解，浓度20mg/ml.
组织消化液
10mM Tris-HCl，pH7。5
10mM EDTA
10mM NaCl
% SDS
LiCl溶液
无水LiCl用去离子水溶解,。
TE溶液
10mM Tris-HCl，
0。1mM EDTA，pH8。0
参考操作程序
加入60ml消化液，再加入1ml蛋白酶K溶液，用涡旋混合器震荡5秒钟。
于55℃水浴2小时。
加入60ml LiCl溶液，用涡旋混合器震荡5秒钟,冰浴10分钟。
13 000rpm离心15分钟,将上清移入一个新的离心管中。
加入240ml无水乙醇,颠倒混匀后室温放置10分钟。
13 000rpm离心10分钟，弃上清，用70％乙醇将沉淀洗一次。
13 000rpm离心5分钟，弃上清，并将残留乙醇吸干净，室温干燥20分钟。
加入20ml TE缓冲液溶解DNA.
用1%琼脂糖凝胶电泳进行检测。
头发数量对DNA提取结果的影响
将拔取的头发分为6组，分别为1、2、3、4、5、6根头发，,提取DNA并用电泳检测结果。
蛋白酶K消化对DNA提取结果的影响
将拔取的头发分为4组，每组1根，在操作程序中加入蛋白酶K后，55℃水浴时间分别为15分钟、30分钟、45分钟、60分钟,其余步骤按参考操作程序进行。
将拔取的头发分为6组,每组2根,在操作程序中加入蛋白酶K后，55℃水浴时间分别为0分钟、10分钟、20分钟、30分钟、60分钟，其余步骤按参考操作程序进行。
将拔取的头发分为6组