文档介绍：摘要
松树萎蔫病自上世纪以来一直是林业上的毁灭性病害。一般认为,松树萎蔫
病的病原微生物为松材线虫。由于目前对于松材线虫
的防治尚无经济有效的措施,严格检验检疫是阻止该病的发生、传播和蔓延最重
要的途径之一。由于拟松材线虫具有和松材线虫
极其相似的外形特征,而难以将这两种线虫区分,针对这个问题,本文对这两种
线虫的形态学以及分子生物学的鉴定方法进行比较研究,以便找出一种准确、便
捷的检验检疫方法。
本研究分别收集了不同来源的种松材线虫和拟松材线虫,并进行了形态
学鉴定。虽然两种群之间根据雌虫的尾尖突的不同可以将其粗略区分开来,但由
于这一特征的不稳定性,并不能将两种线虫准确的区分。
在研究中,首先探讨
了线虫的最佳提取方法,确认采用法提取线虫基因组,并以
区特异性引物分别对松材线虫和拟松材线虫扩增,均获得了左右的扩增片
段。进一步利用和五种内切酶分别对扩增片
段进行酶切鉴定。结果表明,五种酶的任何一种都能区分松材线虫和拟松材线虫,
而内切酶还能准确区分亚洲型和欧洲型的拟松材线虫群体。
此外,本文还利用种不同的随机引物,通过
技术对松材线虫和拟松材线虫的基因组进行随机扩增,
以探讨区分种间及种内群体的亲缘关系的简便方法,结果显示利用和
为随机引物,法可以明显区分松材线虫和拟松材线虫并与形态学
分类结果相吻合以为随机引物扩增后进行聚类分析的结果也表明,线
虫种内和种间均存在差异,同种线虫在同一地区或临近地区的同源性明显高于其
它地区,而同一地区内寄主对线虫同源性的影响较小。另外,系统发育关系的研
究结果显示出我国松材线虫和北美松材线虫群体有较高的同源性,表明我国部分
地区的松材线虫可能来源于北美大陆。
关键词松材线虫拟松材线虫
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第一部分综述
一松材线虫概述
松树萎蔫病是世纪发生的林业上的毁灭性病害,具有易传播,发病速
度快,难以防治等特点,被称为“没有硝烟的大火’,。到目前为止其病因基本确
认为是由于松材线虫的寄生
而最终导致了松树迅速死亡。松材线虫是中国禁止入境的植物检疫危险性有害生
物之一,也是国际上公认的重要的检疫性有害生物,欧洲和地中海植保组织、
亚太植保组织、加勒比植物保护委员会、泛非镇物检疫理事会均将其列为检疫性
有害生物。
松材线虫的分类学地位
该种线虫属线形动物门侧尾腺纲
滑刃目,滑刃总科
滑刃科〔,伞滑刃属
形态描述
雌、雄虫都呈蠕虫状,虫体细长,长左右中均长度超过,较美国的和日本的都长,日本松材线虫最短。唇区高,
绩缩显著。口针细长,其基部微增厚。中食道球卵圆形,占体宽的以上,瓣
膜清晰。食道腺细长叶状,覆盖于肠背面。排泄孔的开口大致和食道与肠交接处
平行,半月体在排泄孔后约体宽处。卵巢单个,前伸阴门开口于虫体中后
部约处。上覆以阴门盖。后子宫囊长,约为阴肛距的雌虫尾亚
圆锥形,末端宽圆,少数有微小的尾尖突。雄虫交合刺大,弓状,成对,嚎突显
著,交合刺远端膨大如盘。雄虫尾似鸟爪,向腹面弯曲,尾端为小的卵状交合伞
包裹,退化的交合伞在光学显微镜下不易看见,交合伞尾翼是尾的角质膜的
延伸,在尾端呈铲状,由于边缘向内卷曲,从背面观呈卵形,从侧面观呈尖圆形。
病材中的幼虫虫体前部和成虫相似,但其后部则因肠内积聚大量颗粒状内含物,
以至于呈暗色并且结构模糊,幼虫尾亚圆锥形。
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图松材线虫
鉴定特征两性成虫虫体细长,唇区高,缄缩显著
后阴子宫囊延伸呈袋状,长约为肛阴距的
阴门开口于虫体后部处,上覆以宽的阴门盖
雌虫尾端宽圆,无尾尖突或尾端指状,尾尖突长左右
不超过
雄虫尾部由小的端生交合伞包裹,远端膨大如盘。
近缘种
拟松材线虫为本种的近缘种,二者的区别在于
拟松材线虫的雌虫和幼虫的尾端有一明显的指状锐突,长约左右,而松材
线虫的雌虫和幼虫的尾形为广圆形或指状,极少具有尾尖突,即使有也很短,长
约为左右松材线虫端生交合伞为卵形,而拟松材线虫的为方形。
松材线虫的危害
松材线虫病最早于年在日木九州岛的长崎发生,此后该病逐渐扩展到
九州、四国和本州的广大地区,给日本林业带来重大损失。其中日本赤松
和日本黑松是两种高度感病的树种。美国于
年在哥伦比亚和密苏里地区的南欧黑松尸上发现此病,现已遍布美国
个州,危害多种松树。在我国该