文档介绍：甘肃农业大学
硕士学位论文
rd29A基因植物表达载体的构建及四倍体刺槐再生诱导研究
姓名:燕丽萍
申请学位级别:硕士
专业:果树学
指导教师:金芳;夏阳
20050601
‘摘要不良环境如低温干旱盐渍,是影响农业生产和生态环境的一个非常重要的非生物胁迫因素。我国是一个水资源紧缺的国家,干旱和半干旱耕地面积占全国总耕地面积的片的盐渍土壤等待进~步的丌发利用。如何利用这些大面积的土地,提高农作物抗逆性是生物科学的一个重要研究课题。四倍体刺槐腔纳皆炝值南确树种,在改善环境、平原及山区发展圈养畜牧业以及植树造林等方面都能产生较好生态效益和经济效益。如能提高抗逆性,对西部大开发建设中退耕还林,改善生态环境,发展圈养畜牧业具有十分重要的意义和广阔的市场前景。故本文通过四倍体刺槐根、茎、旱、盐碱、寒冷都有抗御功能,因此,本项研究拟进行克隆拟南芥鼓婊颍建植物表达载体,为植物抗逆基因转化提供可利用的基因。转虻目购担寡巍耐低温作物新品种的育成必将对提高作物的单位面积产量和扩大种植区域产生积极的对引物,锷杓剖备莺笮菇ㄖ参锉泶镌靥宓男枰#谏嫌我镆欢思尤胍个拟南芥总欣┰龀鰎基因的全长片段。将其克隆到籘双酶切,获取颍淞拥街屑湓靥錎僖缘ッ盖蠬消化,用下进行连接,构建了由组成型启动子骺氐膔基因的植物表达载体,采用直接转化法将导入根癌农杆菌菌株运谋短宕袒钡陌肽局驶壑ξM庵蔡澹ü跏寂嘌竦梦蘧绾螅∪∥菌苗的不同部位作外植体,如幼嫩茎段、较老茎段、接触培养基的肥厚叶片、正常叶切%;其次,低温冷害是我国南北方农业生产长年发生的灾害;除此之外,我国还有大叶建立了一套完整的再生体系,为转基因工程育种提供了可靠的依据。蚨杂推动作用,转虻目狗巧锬婢沉帜竞筒堇嘈缕分值挠山N夜幕肪潮;和美化带来可观的社会和生态效益以及经济效益。本实验的完成对于植物品种改良具有軬中已发表的虻腸蛄猩杓撇⒑铣闪艘坏悖谙掠我镆欢思尤肓薑坏恪Mü齊狿的方法从低温处理的中。经测序证明该片段与媳ǖ赖男蛄芯哂%的同源性。克隆载体用餒将其目的片断和与表达载体赥。用傅淖为利用蚋牧贾参锟鼓嫘缘於宋镏驶重要意义,主要从两个方面进行了研究:
株。结果表明,幼嫩茎段、肥厚叶片和根尖是比较好的外植体,茎段和叶片不经过暗培易产生不定芽,而根暗培H牍馀嗖欢ㄑ啃Ч谩S纫杂啄劬ザ斡盏疾欢ㄑ啃果最好,幼嫩茎段、%、.ィ欢杂为培养基盐份/、主根、侧根、根尖切段经不同培养基及激素诱导分化培养和生根培养,形成再生植茎段和叶片而言,在不同激素中以瓸闚浜鲜褂眯Ч慵眩罴雅嘌,.欢獠欢ㄑ坑/。在生根培养基中,/生根率高达ァ1狙芯砍醪浇⒘艘惶赘咝У乃谋短宕袒痹偕低常关键词:颍籖恢参锉泶镌靥澹凰谋短宕袒保徊欢ㄑ坑盏悸剩辉偕仓下一步进行农杆菌介导的遗传转化奠定了基础。/
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,半乳糖苷异丙基。.虼肴樘怯英文名称苄基氨基嘌呤羧苄青霉素溴化乙锭赤霉素吲哚丁酸卡那霉素激动素萘乙酸光密度‘、、缓冲液玉米素利福平氨苄青霉素中文名称。猯。。—產’、.甶—‘‘.···瓸.‘、、狦’。
把踪研究和创新,抗盐基因工程研究进展较为明显,克隆了脯氨酸合成酶⑸分复杂的生理生化过程,代谢途径具有多样性和复杂性的特点,涉及到的酶很多,都是力作用甚微。目前国际上着眼于抗逆代谢途径简单、清楚、综合抗性优良和抗逆类型广鼓婊虻姆掷搿⒖寺『妥;恢笔枪谕饪蒲Ъ已芯康娜鹊悖壳翱鼓婊蚬程的研究主要集中在逆境条件下/D鼙泶锏哪承┗虻难芯浚缟傅鞍住A硪环矫嬖是在抗逆代谢过程中某些酶的研究。目前已分离出大量与抗逆代谢相关的基因,如与抗盐有关的脯氨酸合成酶基因縄,抗冻抗寒相关基因如鱼抗冻蛋白颉拟南芥叶绿体姿岣视王;R泼富蚣耙恍┲参锶ケズ突颉。”,还克隆了一些与抗旱有关的基因如茧蜜糖合成酶基因等【。我国在抗逆基因工程研究方面已取得了一定的进展,经过“七五”、“八五”十年的跟菠菜碱脱氢酶⒘姿岣事洞纪亚饷傲姿嵘嚼娲纪亚馑等耐盐相关基因—¨ü;讲げ薆颍竦昧四%的苜蓿,耐的草莓及酬难滩荩终急附醒艏涫匝椤5俏夜诳鼓婊虻分离、克隆和转化方面的研究起步比较晚,与抗虫、抗病基因工程相比是一个薄弱环节节,尤其是在分离新的基因方面的研究与发达国家差距较大。出于生物的抗逆过程是十多基因控制的,仅解决代谢途径中的某个酶或某个逆境胁迫蛋白,对改善植物的抗逆能的基因的分离与克隆,这无疑也是我们今后努力和主攻的目标。国际农林水产业研究中心和理