文档介绍：厦门大学
硕士学位论文
三角梅核糖体失活蛋白的基因克隆和表达研究
姓名:宋丽娜
申请学位级别:硕士
专业:发育生物学
指导教师:周涵韬
20060701
摘要盖形坏悖蚺终止密码子和械难拮先敲菲分核糖体失活蛋甶琑唬且焕嗑哂锌共《净钚缘牡鞍祝通过直接作用于核糖体来抑制蛋白质的合成。萁峁沟牟煌煞治种类型:型和型。是从三角梅中分离出来的一种秃颂翘迨Щ畹鞍祝悄壳八现的毒性最低的一种根据已报道的序列,设计合成两条引物,在两条引物上分别添加盖形坏悖酉妹疟镜氐墓庖度敲坊蜃锟寺〕隽艘恢中碌暮颂翘迨Щ畹鞍谆颉=ɑ竦玫腂蛄拥籘载体后,进行了测序分析。结果表明长度为胍驯ǖ赖腂因同源性为%,但推导出的氨基酸序列里,第被岽Τ鱿至艘桓鲋罩棺印用蚗盖泻螅刖盖械膒柿A樱构建了表达载体:刈樽觩拇蟪Ω司鶥诱导表达,菌液及菌体超声破菌后沉淀和上清%甈缬荆盏季泳道及超声沉淀泳道均可见一分子量约为牡鞍滋醮隑姆肿恿课合,而未诱导菌液与超声上清无相应条带,这说明以包含体形式正确表达。对诱导条件进行了摸索,在℃下诱导∈碧跫翨鞍妆泶锪孔罡摺法进行毒性检测,检测了重组蛋白对┫赴亩拘宰饔茫砻骰竦玫重组蛋白具有一定的细胞毒性。本研究从具有厦门特色的光叶三角梅,利用基因工程方法克隆具有自主知识产权的三角梅失活蛋白的基因,构建其原核表达系统,并获得有活性的蛋白质。基因的成功克隆和表达为结构和功能的研究奠定了基础,也为农业抗病虫害和医学上抗肿瘤的应用提供了依据。关键词:三角梅;核糖体失活蛋白;;克隆:表达
%狿甌甌,Ⅵ襁.%.把、砘.—甊·./.、%.瑆
築.;;籆;;
声明人‘签名’:盔孙细丫旯翷,日厦门大学学位论文原创性声明兹呈交的学位论文,是本人在导师指导下独立完成的研究成果。本人在论文写作中参考的其他个人或集体的研究成果,均在文中以明确方式标明。本人依法享有和承担由此论文产生的权利和责任。
孙郦够,胁寸⒉槐C芰桑丫诳、匿厦门大学学位论文著作权使用声明啤阱沙午讼本人完全了解厦门大学有关保留、使用学位论文的规定。厦门大学有权保留并向国家主管部门或其指定机构送交论文的纸质版和电子版,有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅,有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索,有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。本学位论文属于⒈C年解密后适用本授权书。朐谝陨舷嘤ê拍诖颉啊獭年名签者师作导月期秽,
前言颂翘迨Щ畹鞍椎难芯扛趴正常细胞的大,人们对之又投入了更多的兴趣,并发现了它们能使核糖体失活、核糖体失活蛋白的一般性质核糖体失活蛋,姆⑾掷酚Ω米匪莸年,紫忍岢霰吐樽拥亩拘杂Ω霉橐蛴谀持值鞍字省K孀⑾至吮吐槎镜鞍和发现了相思子毒蛋白捌淠鼗钚裕珽用蚢对兔子进行了免疫学试验获得了相应的抗体。年,确⑾终庑┒舅囟愿顾┫赴亩拘员榷抑制蛋白质生物合成的特性。我国科学家发现,被失活的核糖体在无细胞体系中的蛋白质翻译活力可以被硼氢化钠或者氨基酸部分地恢复。核糖体失活蛋白是一类专门作用于真核细胞抑制核糖体功能的毒蛋白。它们来自于细菌、真菌和高等植物。,分别通过专一脱去坏愕南汆堰屎妥ā懈頖位点嗟牧姿岫ゼ兄购颂体的蛋白质生物合成功能。植物雌浣峁沟牟煌煞治A街掷嘈停篒型和Ⅱ型。蚏由一条多肽链组成,在植物界中分布比较广泛,目前已在多种植物中鉴定纯化出缣旎ǚ鄱镜鞍琓乐奚搪范镜癐白琍取蚏由春虰链组成,两条链通过二硫键相连接,如。春虸型谎哂蠷擒彰富盍Γ梢允购颂翘迨Щ睢淳哂心毓δ埽梢杂胂赴砻嬉訢一半乳糖为末端的糖蛋白或糖脂结合,并帮助创┠そ胂赴难芯烤哂兄匾5睦砺塾胧导庖濉@砺凵希琑对核糖体的作用可以作为研究蛋白质与核酸相互作用的模型;实践上,以5返拿庖叨舅卦谥瘤及自身免疫疾病的治疗研究中已取得了很好的结果,同时诙⒅参锟共毒等方面也有潜在的应用前景。随着对芯康纳钊耄址⑾置乐奚搪蕉镜鞍旎ǚ鄣鞍等芄灰种艸病毒在急慢性感染的淋巴细三角梅核糖体失活蛋白的基因克隆和表选研究
细菌谋ǖ篮苌伲<挠兄竞鼐勘泓核糖体失活蛋白的定义和分类筛萜浞肿咏峁沟牟煌治5チ和双链两种类型。蚏,胞、单核巨噬细胞中的复制,而对正常细胞没有毒性。这一结果引起了人们的极大关注,也为难芯靠M亓艘桓鲂碌姆较颉“核糖体失活蛋白”一词最初的定义是:能使动物核糖体失活,但结构和酶活性未知的植物蛋白。在阐明了院颂翘宓淖饔没.,。这样,就使其与那些通过其它机制使核糖体失活或损害的蛋白区分开来,如富虻鞍酌..只有一条多肽链,如蚉等,相对分子量大多在—洌哂擒彰富钚浴5行﹍型姆肿恿拷闲。绱永プ阎蟹掷氲的⒛牡龋、从角瓜掷氲..,⒋铀抗籽中分离的膌熊长云等,—.,蚏