文档介绍：实验利用流式细胞术分析细胞周期时相
细胞生物学实验
1
流式细胞术分析细胞周期时相
实验目的
实验原理
仪器、材料与试剂
实验步骤
实验报告及思考题
2
实验目的
掌握流式细胞仪的工作原理
掌握用流式细胞仪测量细胞群体DNA含量分布的方法
了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用
细胞周期时相分析
3
实验原理
流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。
细胞周期时相分析
4
仪器、材料与试剂
仪器：流式细胞仪，细胞培养设备，离心机，水浴，冰箱
材料：HeLa细胞，5ml注射器，离心管，封口膜，微量移液器，Tips
试剂：70％乙醇（保存于4℃），RNase-A （10mg/ml,-20℃保存），
PI （650µg/ml，避光保存于-20℃），PBS(pH ，保存于4℃)
细胞周期时相分析
5
实验步骤
取对数生长期细胞，倒去培养液，胰酶适度消化细胞，用培养液吹打，800rpm , 离心 15 min去上清。
PBS洗2次， PBS吹匀，务必吹散。
用5mL注射器将细胞吸起