文档介绍：紫外可见分光光度法与荧光分光光度法
紫外可见分光光度法
1、紫外光谱与分子结构的关系
2、紫外可见分光光度计
3、定量测定基本原理
4、定性与定量方法
5、光电比色法
吸收光谱的来源
所有原子和分子均能吸收电磁波，其对吸收的波长有选择性。这种现象的产生主要是因为原子和分子的能量具有量子化特征
在正常状态下的原子或分子处于一定能级即基态，经光激发后，随激发光子能量的大小，其能级提高一级或数级，即分子由基态跃迁到激发态。
当以某一范围的光波连续照射分子或原子时，有些波长的光被吸收，产生被吸收谱线所组成的吸收光谱
分子的吸收光谱分为三类
转动：只涉及分子转动能级的改变，能级间距离很小，吸收光子的波长长，频率低。能级相差10-3~10-2kcal/mol，单纯的转动光谱发生在远红外区和微波区
振动：振动光谱反映分子转动和振动能级改变，引起这种改变的光子能量比第一种高，~10kcal/mol，产生于波长较短，频率较高的近红外区，主要在1~30µ的波长区。
电子光谱：吸收光子后使电子跃迁，产生电子能级的改变，即为电子光谱。能量为20~300 kcal/mol。
电子光谱位于紫外区和可见区，其波长和能量的关系
波长(nm) 180 200 300 400
波数(cm-1) 55555 50000 30000 25000
能量 159 143 95 72
(kcal/mol)
紫外区与可见区
波长(nm)
真空紫外区 10~185
远紫外区 185~200
短紫外区 200~300
近紫外区 300~380
紫色 380~400
蓝色 400~500
绿色 500~580
黄色 580~600
橙色 600~620
红色 620~780
紫外吸收光谱反映分子吸收能量后所产生的电子跃迁，反映分子的电子结构特征，为物质结构的研究提供重要信息，分子的紫外光谱吸收带的波长和强度是化合物的常数之一。
由于仪器和操作方法的限制，紫外光谱只适合于具有不饱和双键系统的分子。电子跃迁受分子结构的影响，所以紫外光谱能部分反映分子中电子间的相互作用。