文档介绍：成都中医药大学
硕士学位论文
用基因芯片研究热药治疗寒证的差异基因表达谱
姓名:冯韧
申请学位级别:硕士
专业:中西医结合基础
指导教师:王米渠
20040401
中文摘要寒证所涉及的相关基因类别,为评定寒证的分子疗效,探索寒证用基因芯片研究热药治疗寒证的基因表达谱,分析用个因子的寒证量表,经中医诊断学教授把关,周血,提取血液中的,再逆转录为以备检测。采用针,再进行分子杂交,得到治疗前后的差异基因芯片表达谱,通过计算机扫描后获得分子生物学信息,并进行数据分析。结果;经热药治疗后せ颊哂忻飨缘牧菩В醪缴选出了差异表达基因条,其中热药治疗后上调基因条,热药治疗后下调的基因条,它涉及到病理性基因,及能量代谢、糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢、核酸代谢、免疫和内分泌相关等嗷颍⒕倮得鳌讨论:达有条下调,大多是一些病理性基因,上调的条多为以正常代谢有关的生理性基因。结合热药治疗寒证后基因表达谱的改目的:的分子机理奠定基础。精选典型寒证病例,对治疗有明显疗效者,在治疗前后分别采外条人的靶基因制备成基因表达谱芯片,用虲两种荧光物质分别标记治疗前与治疗后,用其制备成探本研究中经热药治疗后寒证症状改善明显,基因表变和寒证症状的改善,可以认为寒证和寒证症状与基因表达有密切的相关性。提示基因芯片的高通量,平行检测的特点符合中医整体观念和辨证论治的特点,可以从微观基因水平研究寒证的整体机理,并探索评定其分子疗效的方法。方法:
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前言“寒证”是中医认识疾病特有的概念,中医是用“证”这个概念来对人体疾病进行本质性认识的,证不仅是对人体各种功能态的一种认识,“证”还是症状和体征的集合,是疾病的临床综合表现。“证”是客观存在的病理状态,是中医病机的反映,表现了疾病过程中邪正相争和阴阳失调的情况,中医诊病实际上就是辨证。中医辨证方法有多种,八纲辨证是各种辨证的总纲,其核心就是根据四诊资料,应用中医理论进行分析综合,概括病变的大体类别酢⒀、部位怼⒗、性质⑷以及邪正盛衰椤⑹,从而反应人体病理功能状态的总体情况,其它辨证均以八纲为总则。八纲辨证是以阴、阳为总纲,辨阴阳,是中医辨证的大法,而寒热是阴阳的表征,寒热就成了中医辨证的一个关键问题。寒证有广泛联系的全面的概念,涉及到多个脏腑的多种证候。表现复杂,传统诊断主观性强,诊断尺度难以把握,热药作用寒证的机理至今是个迷。寒证本质很难以某几项生化指标的改变来认识,从单基因的角度也难以解释,基因芯片有高通量和平行检测的特点,为中医寒证的研究提供了一个很好的工具,利用基因芯片检测寒证的基因表达谱,使寒证诊断客观化、现代化成为可能。我们在导师王米渠的指导下在国家自然科学基金连续资助项目中,作了寒证的系列研究,以附子为热性中药的代表,用大肠杆菌的冷激蛋白基因蛃笫笪Q芯慷韵螅芯咳刃灾幸┒訡基因表达的影响和温热性中药对大鼠生理、免疫、生化、等实验动物生命体征影响的研究基础上,通过临床观察,用基因芯片筛选了寒证服用热药有疗效者的基因表达谱,研究温热中药对寒证病人基因表达的影响,得到其差异表达基因。探索寒证所涉及的相关基因类别和寒证病人基因芯片表达谱,研究寒证的本质、热药对寒证的宏观和微观作用。为进一步研究热性中药的靶基因、热性中药的分子机理奠定了基础,为从微观基因水平研究寒证的整体机理,探索评定其分子疗效的方法作了尝试。
俅补鄄症状、体征进行轻、中、重的等级评分对证候辨证进行定量化的分寒证量表的编制与应用中医理论源于几千年的临床实践,是根据医生与病人的感觉来认识、诊断疾病,不可避免地具有一定的模糊性、不确切性和易变性。中医定性、定量及客观化、规范化的研究已成为中医药现代化研究的重要方向。辨证论治是中医学的精髓,证的研究是中医基础研究的核心。近年,学术界从分子生物学角度、微观辨证、证的动物模型实验等方面开展了大量的探索工作,取得了一定成果【俊>」苷庑┭芯垦罢伊诵矶嘟沂尽爸ぁ钡谋局实氖笛橹副辏揭示“证”的本质方面是良好的开端,但仍不能为“证”的临床诊断、鉴别诊断提供切实可行豹诊断依据,特别缺乏临床实际操作的可行性,更谈不上确立公知公认的诊断标准闭。中医认为“证”的实质是整体层次上各种机能反映状态的总和,其内容泛指医生收集到的可用作中医诊断凭证的有关病人的信息【。故对组成和反映证候本质的要素因子症状、体征的定量化研究,具有长远开发意义。《黄帝经》、《伤寒杂病论》已经开创了中医半定量的先河ú⑽引起人们在临床辨证过程中的足够重视。近年来开始采用主症加次症的诊断模式,并见于国家或部颁的诊断依据U庋恼锒戏椒ㄔ诹俅舱锒现泄然发挥了一定的作用,但仅仅强调了某一辨证因子的存在与否,当辨证要素的轻重程度、出现频率、持续时间等发生变化时,其诊断的准确性就大为下降。可见,对证的辨证因子症状、体