文档介绍：冰冻切片组织的制备 :
固定
将组织置于 4% 多聚甲醛固定液中， 4 ℃摇床过夜。
漂洗
将固定后的标本用 1X PBS 漂洗三次，每次 15 分钟。
脱水
将组织置于 30% 蔗糖溶液中， 4 ℃摇床过夜。第二天观察是否脱水完全，判断的
标准是，当管竖直时，组织是否沉到蔗糖溶液的底部，若组织已完全沉降到蔗糖
溶液的底部，平放或震荡后仍能沉降，则可判断组织已脱水完全。
包埋
将组织倒入培养皿中，用眼科刀将脑和脊髓根据切片切面的需要在不同的部位切
开，并做好头尾端的标记。之后将组织置于包埋盒中，用滤纸吸干组织周围多余
的蔗糖溶液，滴加 OCT ( optimal cutting temperature compound )到包埋
盒中，用移液枪头小心的将组织周围的混匀，切忌起气泡，静止 10 分钟，
以防切片时脱片。重新取一个包埋盒，将组织移入到包埋盒中，倒入 OCT ，再
在包埋盒上做好标记，用保鲜膜和锡纸包好后
，将组织按切片需要方向摆放于包埋盒的底部，迅速置于干冰与酒精的混合物中。
放入 -80 ℃冰箱贮藏待切。
切片：
切片前先将切片机的箱体温度及刀头温度均设为 -20 ℃，把包埋盒从 -80 ℃冰箱
取出置于切片机中平衡半小时左右。之后将包埋块用固定在样品托上，然
后将样品托固定在样品头上，调整合适的位置，以使样品与刀头处于平行位置。
手动切片。用细毛笔将切片均匀整齐地平铺在明胶包被的载玻片上，室温下晾片
30min-1h 后进行免疫组化染色。
冰冻切片的快速染色法
冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定 1 分钟后即可染
色。以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固
定。根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变
性，核内含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种
物质。冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，这样可以使
切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，核染色质清晰，
核仁明显，其他物质都完好保存。
方法：
切片固定 1 分钟。
水洗（肉眼观察，洗净即可）。
染苏木素 5 分钟。
1% 盐酸酒精分化。
于碱水中返蓝 10 秒。
伊红染色 10 秒。
，透明，中性树胶封固
冰冻组织1—2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色共五分钟。总共在
10分钟内完成快速制片过程，结果与石蜡切片不相上下。
冰冻切片的方法还有很多种，如甲醇循环的半导体冰冻切片法，二氧化碳冰
冻切片法，半导体冰冻切片法和***乙烷冰冻切片法等，这些方法在目前来说已很少使用，因此在这里不作阐述。
冰冻切片免疫组织化学染色：
小片将贴有组织的载玻片在空气中晾干，约 30min-1h ;
②漂洗在1X PBS中漂洗3次，每次15 min 。 PHT室温下孵育30 min ;
③一抗孵育将切片放在湿盒内，用滤纸吸干玻片上多余的水分，滴加 200 Ml
抗工作液，盖好封口膜，4c孵育过夜，约18h-24h ;
④漂洗在1X PBS中漂