文档介绍：中回鍪拜太零博士学位论文论文完成时间:—垫盟土璺患嶂鳌莸学科专业:——·学号题騌Ⅱ“郿研冤生导师
度磁场中,继续培养、T诿渴奔涞阌τ肕法,测定中的随着生物磁技术的迅猛发展,磁治疗在医学中的基础和临床应用研究越来越受到关注,但是有关静磁场对牙周炎组织生物效应的研究未见报道。成骨细胞是保持骨形态结构和性能的最小结构和功能单位,作为骨组织的重要功能细胞,在骨的形成过程中起着关键作用。成骨细胞的增殖、骨基质的分泌和钙盐沉积对骨的形成、重建和修复具有重要意义。本实验通过建立体外培养大鼠颅骨成骨细胞实验模型,排除了体内复杂的生物环境因素的影响,观察不同剂量的静磁场对体外培养的成骨细胞生长的直接效应,专一的分析研究静磁场刺激对成骨细胞的生长和功能变化的影响;建立牙周炎动物实验模型,研究静磁场对牙周膜组织结构、功能的影响。从细胞水平和分子水平探讨静磁场对骨生长的作用机制,为临床选择合适的磁场参数,科学的利用磁场疗法,提供实验依据。泊懦〉纳杓将钕铁硼永磁体充磁后固定于特制的长方形槽内,其上方可以放置各种细胞培养板,调节槽装置的高度,使培养板底部的磁场强度分别为笫舐浅晒窍赴姆掷搿⑴嘌无菌操作下取出乳鼠头盖骨,刮去骨膜和软组织,经ヒ酶和疘蛐徒涸赶螅τ貌钏兖じ椒ǚ掷氤上宋赴糜℃、罕ズ褪6鹊呐嘌渲信嘌天换液,待细胞长满平底后传代,备用。晒窍赴脑鲋郴钚圆舛成骨细胞接种于孔培养板内培养ǜ髋嘌宸直鸱湃氩煌文摘要目方法、
细胞接种于衄直径的培养皿内培养ǜ髋嘌蠓直鸱湃氪、>,加入液,酶联免疫检测的值。实验重复巍魇较赴遣舛ǔ晒窍赴芷场强度为、岱的磁场中,继续培养.%胰酶消化,加入染液,流式细胞仪检测细胞芷凇J笛橹馗次。晒窍赴鸄旧ḿ盎钚圆舛传代成骨细胞接种于盖玻片上培养⒂磁场环境中继续培养细胞2捎酶牧几祁芊ń蠥酶染色。成骨细胞接种子孔培养板内培养,并施加不同强度的磁场处理仪上测定怠晒窍赴腎型胶原免疫组化染色及印记分析传代成骨细胞接种子盖玻片上培养⒂磁场环境中继续培养细胞H〕龈遣F9潭ǎ捎胹ń蠭型胶原免疫组化染色。细胞接种于本兜呐嘌竽谂嘌,放人磁场强度为磁场中继续培养、J占⒘呀庀赴τ脀〖欠ú舛晒窍赴逋飧苹觳将细胞以/分别接种于孔培养板的两侧,培养螅其中一侧加懦。ㄆ诨灰海嘌周。倒置显微镜下观察细胞的形态和骨结节的数量。锸笛牙周炎动物模型制备应用不锈钢丝结扎法制备大鼠牙周炎动物模型。芎笕コ扎丝,在大鼠头部颊部区切开皮肤,将充磁和未充磁的钕铁硼永磁体分别埋入皮下组织中,于实验后第、齑λ来笫蟆G腥〔≡钛兰捌渲芪а乐组织制备标本。行染色,光镜下观察牙周膜组织结构,电子显微镜下观察超微结构变化拿庖咦橹旧ê驮辉咏患觳组织切片采用法进行免疫组化染色,其中一抗工作浓度徒涸·
为簂∞。组织切片经胃蛋白酶处理,预杂交液℃作用∈,恒温箱℃杂交过夜。嗖钕晕⒕迪鹿鄄煸嘌晒窍赴男翁经差速黏附法分离的成骨细胞培养螅杉赴仕笮巍⑷切巍多角形等散在贴壁生长。左右基本长满培养瓶底。泊懦《猿晒窍赴脑鲋匙饔在加磁,经磁场处理的成骨细胞值明显增加,与楸冉嫌邢灾圆钜欤琍.。而磁场处理组细胞的促增殖作用不明显,泊懦《猿晒窍赴芷诘挠跋经懦〈恚珿疓,期细胞所在比例降低,凇:/谙赴分比显著高于对照组,>懦〈淼南赴銼期和海谙赴俜直扔攵哉兆橄啾任廾飨员浠泊懦《猿晒窍赴鸄酶的影响成骨细胞浆处均可见有黑色颗粒状物质,有些融合成片,以磁治疗组明显。静磁场作用蠹纯晒鄄斓紸活性增高,静磁场促进傅暮铣勺饔米钋浚攵哉兆橄啾染哂忻飨圆钜欤琍.。泊懦《猿晒窍赴鸌型胶原的影响成骨细胞的胞浆呈棕黄色,为粜匀旧ā4懦≈瘟谱锽阳性细胞染色较深。蛋白印记结果表明静磁场影响徒涸诔晒细胞中的表达,与对照组相比,饔玫时,成骨细胞徒涸达明显增加。泊懦《猿晒窍赴逋飧苹挠跋细胞紧密排列,呈多角形、方形等,并可汇集成集落。相差显微镜下可见磁场处理组有多个散在的高密度区,呈折光性很强的亮点,中间的细胞被所分泌的外基质包埋后,形成明显的钙化结节,非磁处理组此现象少见。乐苣旧ń峁牙周炎组:牙周袋形成,牙周膜纤维排列紊乱,牙槽骨表面凹陷吸收,可结果.
见多量破骨细胞。牙周炎磁治疗茏椋貉乐芟宋帕薪险耄啦酃潜砻成骨细胞增多,在骨表面处骨细胞大且明显。乐苣さ缇倒鄄饨峁牙周炎时成纤维细胞的胞浆减少,细胞器不发达。牙周炎磁治疗组成纤维细胞突起多,胞浆丰富,有发达的粗面内质网和核糖体。染色结果正常组与牙周炎组间蛋白表达无明显差异,牙周炎磁治疗组与牙周炎组问存在明显差异,在牙周炎时,牙周膜成纤维细胞、成牙骨质细胞、成骨细胞及胶原纤维等处可见阳性杂交信号。牙周炎磁治疗组,粜栽咏恍藕挪同程度的增强,以磁治疗第烀飨浴⒁欢ㄇ慷鹊木泊懦《蕴逋馀