文档介绍：·96· 生物技术中国畜牧兽医 2011年第38卷第7期小鼠肝炎病毒金标快速检测方法的建立胡晓燕,佟巍,刘先菊,张丽芳,刘云波(中国医学科学院北京协和医学院,医学实验动物研究所,北京 100021) 摘要:本试验旨在探讨一种能够快速、简便及特异检测MHV病毒的金标检测方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗小鼠肝炎病毒(MHV)抗体,选择优化层析条件。建立双抗体夹心模式的免疫层析法试纸条对MHV进行检测。 20nm左右的胶体金颗粒、( mL胶体金)、M135层析材料、3%BSA是最佳封闭液。640 “g/mL抗体蛋白为最适检测线包被浓度,而800 pg/mL抗体蛋白为质控线最适包被浓度。此试纸条能10 rain快速特异地检测出MHV抗原,阳性时检测线和质控线均显示红色,阴性时则只有质控线显示红色。结果表明,胶体金免疫层析方法能快速、特异、稳定地检测MHV抗原。关键词:小鼠肝炎病毒;抗小鼠肝炎病毒抗体;胶体金;胶体金免疫层析法中图分类号:$+3 文献标识码:A 文章编号:1671-7236(2011)07—0096—05 小鼠肝炎是由小鼠肝炎病毒(MHV)所引起的一种传染病,它广泛存在于世界各国的实验小鼠群中。在中国普通鼠群的感染率高达20%,严重影响了实验小鼠的质量和试验结果(殷震等,1997)。目前中国的实验动物领域研究正在逐步与国际接轨, 加强对小鼠肝炎病毒的研究不仅对提高实验动物质量具有重要意义,同时对于新型冠状病毒的研究也会有一定的帮助(高骏等,2004)。小鼠肝炎病毒(MHV)属冠状病毒科冠状病毒属,为单链RNA病毒。MHV可分为两大类:呼吸道毒株和肠道毒株。其中,呼吸道毒株有MHV-1、 MHV一2、MHv-3、MHV—JHM、MHV—A59等;肠道毒株有MHV—Y、MHV—S、MHV—U等。呼吸道毒株可在呼吸道上皮、神经系统、肝脏、气管中进行复制,而肠道毒株往往仅限于在肠道内复制(殷震等, 1997)。中国实验动物质量控制中规定检测MHV- 1、MHV一3、MHV—JHM、MHV—A59四个毒株。免疫胶体金技术是继酶标记、放射免疫标记、荧光标记三大标记技术后成熟起来的四大免疫标记技术之一,在医学、动植物检疫、食品安全监督各领域得到了日益广泛的应用(詹曦菁等,2001)。主要方法有免疫层析法(immunochromatography)和快速免疫金渗滤法(dot—immuogold filtration assay, 修回日期i201I-05—26 作者简介:胡晓燕(1984一),女,山东人,硕士,研究方向:实验动物学。通信作者:刘云波,男,研究员。E-mail:liu—yunbo@ 基金项目:中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(DWS200906)。 DIGFA)两种(方莹,2006)。胶体金免疫层析法(colloidal gold immunochromatography assay,GI— CA)(Zuk等,1985)以敏感度高、特异性强、操作简便的特点在感染性疾病的血清学诊断,尤其在大规模的流行病学调查中得到广泛应用。本研究利用抗小鼠肝炎病毒多抗研制双抗体夹心法GICAs,建立了小鼠肝炎病毒快速检测方法,报道如下。 1材料与方法 、小鼠肝炎病毒(