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紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。
【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度
引言
维生素C（抗坏血酸）和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。
2、实验原理
根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。
混合组分中在λ1处的吸收等于组分A和组分B分别在λ1处的吸光度之和Aλ1A+B，即：
Aλ1A+B=κλ1AbcA+κλ1BbcB
同理，混合组分在λ2处吸光度之和Aλ2A+B应为：
Aλ2A+B=κλ2AbcA+κλ2BbcB
若先用A、B组分的标样，分别测的A、B两组分在λ1和λ2处的摩尔吸收系数κλ1A、κλ2A、κλ1B、κλ2B；当测的未知试样在λ1和λ1处的吸光度Aλ1A+B和Aλ2A+B后，解下列二元一次方程组：
Aλ1A+B=κλ1AbcA+κλ1BbcB
Aλ2A+B=κλ2AbcA+κλ2BbcB
即可求得A、B两组分各自的浓度cA和cB。
cA=（Aλ1A+B·κλ2B-Aλ2A+B·κλ1B）/（κλ1A·κλ2B-κλ2A·κλ1B）
cB=（Aλ1A+B-κλ1A·cA）/κλ1B
一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A、B两组分最大吸收峰处或其附近。
3、紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
、仪器试剂
仪器：紫外-可见分光光度计（天津港东UV-4501S），石英吸收池一对
试剂：维生素C（抗坏血酸），维生素E(α-生育酚)，无水乙醇
、实验步骤
、 检查仪器
开机预热20min，并调试至正常工作状态。
、 配制系列标准溶液
（1）配制维生素C系列标准溶液：称取维生素C，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为×10-5mol/L。分别吸取上述溶液 mL， mL， mL， mL于4只洁净干燥的50 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。
（2）配制维生素E系列标准溶液：称取维生素，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，