文档介绍：: .
实验四
阻断酶联免疫吸附试验
（阻断EL ISA）
免疫标记技术
1 •定义:
将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射
性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通 过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。
：
/放射免疫测定法32p
/免疫荧光技术：FITC, PE
/免疫酶测定法：HRP, AP
免疫酶测定法
(Enzyme ImmunoAssay, EIA)
用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应O
-辣根过氧化物酶(HRP),碱性磷酸酶(AP)
•特点：
/高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性
/高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，p***平微量检测
"定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值
•分类:
酶联免疫吸附试验：可溶性抗原或抗体
/酶免疫组化法：组织中或细胞表面的抗原。
酶联免疫吸附试验
(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)
1 •定义
2 •原理
用酶标记抗原或抗体检测液体(血液、细胞液) 中未知抗体或抗原的方法。
(1)利用抗原与抗体的特异反应将待测物 与酶连接。
(2)通过酶与底物产生颜色反应，用于定
量测定。
-测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
> 直接法(direct EUSA):
* 3・常用 种类
将已知抗原直接吸附于载体，加酶标抗体
* 检测抗体 间接法(IndirectELISA):
* 将已知抗原吸附于固相载体，加酶标记二抗
* 检测液相中未知抗体 双抗体夹心法(SandwichELISA)：
* 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗
* 检测液相中的可溶性抗原 竞争法(Competitive ELISA)；
* 将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体
* 检测液相中的可溶性抗原或抗体 阻断法(BlockELISA)：
* 将已知抗原吸附于固相载体，酶标记单克隆抗体
* 检测液相中的可溶性抗体
(1)直接法测定抗原
A.
将抗原吸附在载体表面;
B.
加酶标抗体，形成抗原一抗体复合物;
C. 加底物。底物的降解量=抗原量。
底物及分解后的产物
图20 I 58联免疫吸附试验直接法(测抗原)示意图
注：图20・1〜图20-8,图标相同
(2)间接法测定抗体
A.
将抗原吸附于固相载体表面;
B.
-抗体复合物;
加酶标抗
D.
加底物。测定底物的降解量=抗体量。
wash
■
AnUgcin- coated well
Actd subslrate(S)i arvd measure colof
Indirect ELISA
AdSd specific Add enzyme- antibocfy conjugated ^s^e<x>ridary antibody
(3)双抗体夹心法测定抗原 A.
B.
C.
将抗体吸附于固相表面；
加待检抗原，形成抗原-抗体复合物;
加酶标抗体；
加底物。底物的降解量=抗原量。
图20 4靜联免疫吸附试验(双抗体夹心法)示意图
（4）竞争法测定抗原
A.
将抗体吸附在固相载体表面;
B.
同时加入酶标抗原和待测抗原，竞争结合抗体；对照只加入酶标抗原;
C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗原量。
图20-6前联免疫吸附试验（竞争法）示意图
(5)阻断法测定抗体
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为 猪传染性胃肠炎(TGE).猪伪狂犬病(PR)及猪 胸膜肺炎(AP)的主要检测方法。
A. 将抗原吸附在固相载体表面;
B. 先加待检血清(抗体),形成抗原-抗体复合物;
C. 再加酶标单抗;
D. 加底物。
酶联免疫吸附试验
(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)
-抗原-.
(以ELISAS 例):
I —