文档介绍：第二军医大学
博士学位论文
Bt和CpTI双价抗虫基因共转化菘蓝提高对害虫抗性的研究
姓名:丁如贤
申请学位级别:博士
专业:生药学
指导教师:张汉明
20070501
渺签字目期:锎年拢学位论文作者签名舜姥签字日期:。唧年莎月蝗ⅲ独创性声明学位论文使用授权书声明签字日期:莎们厂阥月本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ学位论文作者签名导师签名:辢馏
荆甌摘要本研究构建分别带有疉俐基因和印玎基因两表达盒的植物表达载体质表达量,发现阑虻鞍妆泶锪靠筛叽..。采用农杆菌介导转化菘蓝。双基因转化的阳性率二倍体子叶是.%,四倍体子叶是.%。杂交分析,结果转基因菘蓝出现预期的杂交带,未转化植株没有杂交信号,并都呈单一拷贝。觳饣虻牡鞍/珻/可达/S米;蜉坷兑镀俏鼓勘旰Τ嫘〔硕辏辛街昴芡耆彼滥勘旰Τ妫昴懿糠稚彼滥勘旰Τ妫以上的转基因植株具有明显抑制害虫生长的作用。转抗虫基因菘蓝前后有效部位成分含量没有明显变化。关键词;菘蓝;根癌农杆菌;植物转基因;抗虫;苏云晶芽孢杆菌杀虫蛋白基因基因;∞;.%.%./.%.;;
摘要晶芽孢杆菌杀虫蛋白基因疉∥基因和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因印玎已经整转篮陀被蜉坷兜目钩嫘裕天后观察害虫生长和死亡率。共获得本研究构建以F舳樱直鸫兴赵凭а挎吒司背娴鞍谆蚝汪挂鹊鞍酌敢种萍粱騝蛄奖泶锖械闹参锉泶镌靥,将工程质粒载体导入根癌农杆菌糜谧;坷锻庵体。进一步优化菘蓝组织培养条件,筛选出子叶组织培养再生芽的最佳培养基配方为6暂坷锻庵蔡遄右对偕拷锌敲素ǘ忍荻壬秆。罢移湟种蒲吭偕牧俳绲悖峁砻是菘蓝转化时合适的选择压。菘蓝子叶和下胚轴作为外植体,用带有目的抗虫基因的农杆菌,采用叶盘法转化菘蓝,以未转化的作为对照,在杲闩嘌匣竦每剐栽偕纭检测抗性再生植株,双基因转化的阳性率二倍体子叶是.%,四倍体子叶是.%,阳性转化植株在目标位置均出现特征条带,而对照在相应位置未有条带出现,初步表明外源基因已转入菘蓝基因组。选取部分粜灾仓杲蠸咏环治觯晕醋;仓曜魑6哉眨结果转基因菘蓝出现预期的杂交带,但未转化植株没有杂交信号,说明外源苏云合进入菘蓝基因组且呈单一拷贝。对所有转基因菘蓝品系用觳饣虻牡鞍字时泶锪浚⑾諧纠基因蛋白表达量可高达/珻≯纱./K得髁娇钩婊蛟转基因植物中有较高的表达量,对目的害虫会产生致死和生长抑制作用。挑选阳性植株建立转基因植株再生系统。实验表明基本培养基带有和墙虾玫脑偕嘌A睹缫恢芎罂以进行移栽。用转基因菘蓝叶片饲喂目标害虫小菜蛾鄄株独立转基因植株,有两株能完全杀死目标害虫,有昴懿糠稚彼滥勘旰虫,%以上的转基因植株具有明显抑制害虫生长的作用,而且饲喂转基因叶片后,害虫生长缓慢,化蛹比对照要晚欤急榷哉找P。⑶页鱿忠斐#/第二军医大学博士学位论文中文摘要.
些蛹不能化羽成虫,抗虫效果明显。利用和中药色谱指纹图谱相似性对转基因前后四倍体菘蓝品质进行初步评价。结果表明转基因菘蓝主要抗病毒活性成分和对照没有明显差别;通过图谱比对,转基因前后相似度达到,说明转抗虫基因菘蓝前后有效部位成分含量没有明显变化。关键词:菘蓝;根癌农杆菌;植物转基因;抗虫;苏云晶芽孢杆菌杀虫蛋白基因;豇豆胰蛋白酶抑制剂基因第二军医大学博士学位论文中文摘要
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前言虫害是造成农作物减产和质量下降的主要原因之一。目前控制害虫危害的普遍措旌之一是采用农药。而使用化学农药所产生的环境污染、农药残留、生态环境破坏等一系列严重的后果已世人皆知。过去的几十年里,由于人们在认识上的淡漠,致使人们很少从事植物药材农药残留污染及对药材质量影响的研究,甚至有少数人糊涂的认为植物药的用量远小于食物,对农药污染可不必考虑。但随着人们生活水平、生活质量的提高,大家逐渐认识到农药危害不仅要防止源于食物,同样要防止源于植物药。所以近几年才较多地看到了植物药中农药污染的研究报道。有文献报道,国内在已禁用农药许多年的大田里,栽培生产的药材经过检测仍然含有较高浓度的残留农药;同