文档介绍：第二军医大学
硕士学位论文
双抗虫基因共转化四倍体菘蓝的研究
姓名:王凯
申请学位级别:硕士
专业:生药学
指导教师:张汉明;丁如贤
20050401
签字日期:洲年霸一日导师签名:教洳绣;纰学位论文作者签名:;轧独刨性声明签字日期:多。护岁年络炷学位论文使用授权书声明签字日期:∥呼年露嗜权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文内容编入有关数据库进行检索,可以呆用影印、缩印或扫描等复制手本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定,有被查阅和借阕。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ的法律责任。学位论文作者签名:
要摘组织培养条件,子叶和下胚轴直接再生芽的最构建以F舳樱贝兴赵平鹧挎吒司背娼峋У鞍谆刷桶胂哪鼗的质粒载体畃,导入根癌农杆菌优化菘蓝梯度筛选,考察菘蓝外植体的敏感浓度,结果表明海疞是转化菘蓝合适以子叶和下胚轴为外植体,采用叶盘法转化菘蓝,,W罴鸭に嘏ǘ取:蚿:均出现特征条带,而对照在相应位置未出现条带,初步表明外源基因已转入菘蓝基因组。选取關阳性株进行杂交分析,结果显示外源蚿已经整合进入菘蓝基因组并都呈建立转基因阳性植株快速扩繁体系,叶片和叶柄直接再生芽最佳激素配比为转基因植株经过驯化,一周后即可移栽,,考察转蚿菘蓝的抗虫性。两周后统计,%翅目桃蚜胛醋;蜉坷断啾龋;蜉坷毒哂忻飨蕴岣叩目剐〔说吞已利用和中药色谱指纹图谱相似性评价系统对双基因共转化的菘蓝品质进行初步评价,。/Mü荻§,浓度的选择压。阴性对照,获得了菘蓝再生抗性植株,;粜月饰%。阳性转化植株在目标单一拷贝。采用鳞翅目的小菜蛾屯崮康奶已罬转基因前后图谱相似度达到。关键词:四倍体菘蓝:根癌农杆菌:转基因;半夏凝集素基因;毒蛋白佳激素配比为位置/./偕绲难粜月饰%。;抗虫疞第饺搜妒垦宦畚摘要眎
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刖量极大,板蓝根年使用量在吨至吨之间,大青叶年使用量在肿十余年的努力,完成了菘蓝的同源四倍体育种工作,经数代选育,得到性状稳也都明显超过菘蓝二倍体中的优良品系跻龋。但四倍体菘蓝和二倍体菘蓝一样,在其生长的早期和中期,鳞翅目昆虫白粉蝶尸据躵巴崮康难脸鍹虫害严重,造成减产,板蓝根产量会因此减少三分之一,而大青叶的损失甚至翅目昆虫具有刺吸式口器,靠吸取植物汁液为食。它们的取食不仅引起了菘蓝的直接损失,而且取食时口器造成的伤口会使嘀种虏〔≡靡郧秩局参铮传统的防治害虫方法是反复使用化学杀虫剂,花费浩大,效果却不尽人意。不仅害虫对各类化学农药的耐药性问题日趋严重,而且带来农药在药材中残留严重超标攀锩鞯龋,造成环境污染,威胁人类健康。目前,农药残留超标已经成为限制中药材及中成药出口的瓶颈问题之一。依赖常规的育种手段来获得抗虫植物品种己陷入育种时间长、亲本资源缺乏的困境。生物杀虫剂由于其成本高、自然资源有限及抗虫谱窄等缺点,使其应用受到限制。近年来,现代分子生物学特别是植物基因工程的迅速发展,为植物抗虫育种提供了一条新途径。其基本原理是将外源抗虫基因构建到合适的载体上,转移进植物并表达,筛选有抗虫活性的植株并经后代选择获得纯系。近十年的研究表明,这种方法与使用农药相比,具有使用安全、经济、选择性强的特点豕亓值龋?梢运祷蚬こ碳际醴⒄刮E嘤钩嬷参锲分痔峁┝,药材用右,因而在全国各地广泛栽培。本室乔传卓教授谴康龋课题组经过定、能正常繁殖、根与叶的产量明显增加,且药理实验、活性成分等质量指标小菜蛾所引起的可达到百分之七十以上,极大地影响了药材的供应。鳞翅目昆虫具有咀嚼式口器,取叶肉为食,严重时会将全叶危害成网状;同从而导致菘蓝更为严重的损失。植物抗虫育种的新时代。菘蓝置第二军医大学硕士学位论文前言,
在转抗虫基因作物研究中,棉花,烟草、水稻、玉米和马铃薯等均取得了显和结果初步证明了外源已插入菘蓝基因组并能在植株中表达硖娴龋。但单价抗虫基因的抗虫谱窄且害虫易产生耐受性,本研究试联合两个基因共转化方法解决