DNA抽取和质粒DNA制备.ppt

文档介绍：DNA抽取和质粒DNA制备
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提取DNA总的原则
1 保证核酸一级结构的完整性；
2 其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类 分子的污染应降低到最低程度；
3 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
4 其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
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核酸分子抽提的技术设计
核酸的释放：
破裂细胞 释放核酸
机械法与非机械法（非机械法中溶胞法是应用最广泛的方法）
核酸的分离与纯化：
将含有核酸分子复杂复合物中，将核酸与其他物质分离
非核酸的大分子污染物（蛋白质、多糖和脂类分子）、非需要的核酸分子、试剂和溶液
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核酸的浓缩、沉淀与洗涤
沉淀可去除部分杂质与某些盐离子
加入一定的盐类（醋酸钠、氯化钠等）后使用有机溶剂（如乙醇、异丙醇等）
少数盐类可使用70-75%的乙醇洗涤
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鉴定与保存
（一）核酸的鉴定
浓度鉴定
纯度鉴定
完整性鉴定
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浓度鉴定
1紫外分光光度法：测定DNA在A260nm的光吸收值。
如计算DNA浓度
A260×稀释倍数×50＝ μg/ml
。
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2 荧光光度法
荧光染料溴化乙锭，可嵌入到碱基平面，而发出荧光，且荧光强度与核酸含量呈正比。
适用于低浓度核酸溶液的定量分析。
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纯度鉴定
1 紫外分光光度法：
在260nm和280nm处测定DAN溶液的光吸收，。低于此值表明制备物中留有蛋白质成份。高于此值表明有RNA的残留量。
A260/A280比值是纯度检测的重要指标。
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