文档介绍：从组织培养细胞中分离线粒体
原理：
细胞在低渗缓冲液中会膨胀，这是在Dounce匀浆器中用与匀浆器紧密吻合的研杵研磨几下就会破裂。然后即可在差速离心线分离线粒体。
需注意：溶液、试管、匀浆器都应在冰上预冷。所有离心步骤要在4°C进行。
所需物品：
10ml玻璃离心管，冰冷的PBS，Dounce匀浆器，，4°C离心机。
RSB低渗缓冲液:
10 mmol/L NaCl
mmol/L MgCl2
10 mmol/L Tris-Hcl,
MS缓冲液
525 mmol/L甘露醇
175 mmol/L蔗糖
mmol/L Tris-Hcl,
mmol/L EDTA，
1X MS缓冲液
210 mmol/L甘露醇
70 mmol/L蔗糖
5 mmol/L Tris-Hcl,
1 mmol/L EDTA，
实验步骤：
实验开始前，准备足够的RSB缓冲液（1 ml/次）：每毫升RSB、MS缓冲液中加入2μl蛋白酶抑制剂和1μl DTT。
用10ml玻璃离心管收集5 x 107个细胞。
PBS洗细胞一次，将细胞在4°C 下，600 g x 5 min 离心一次；
弃上清，细胞沉淀重悬于 1ml冰冷的PBS；
细胞在4°C 下，600 g x 5 min 离心一次；
弃上清，细胞沉淀重悬于1ml 冰冷的RSB缓冲液，冰上孵育10 min；
将细胞重悬液全部转移到合适的已预冷的Dounce匀浆器中，用研杵上下研磨30～
50次左右。
注：可在显微镜下检测匀浆的效果。取2～3μl匀浆液滴在