文档介绍：1. 称量。 200-300 目硅胶,称 30-70 倍于上样量; 如果极难分, 也可以用 100 倍量的硅胶 H。干硅胶的视密度在 左右,所以要称 40g 硅胶,用烧杯量 100ml 也可以。 2 。搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/ ***体系,就用石油醚拌;如果洗脱剂是***仿/ 醇体系,就用***仿拌。如果不能搅成匀浆, 说明溶剂中含水量太大, 尤其是乙酸乙酯/ ***, 如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置干燥。***仿用无水***化钙干燥,以除去 1% 的醇。如果样品对酸敏感,不能用***仿体系过柱。 3 。装柱。将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约 1/3 体积石油醚(***仿) ,装上蓄液球, 打开柱下活塞, 将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降, 会有一些硅胶沾在蓄液球内, 用石油醚(***仿)将其冲入柱中。 4 。压实。沉降完成后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定。柱床约被压缩至 9/10 体积。无论走常压柱或加压柱, 都应进行这一步, 可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。 5 。上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。 6 。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好, 推荐用梯度洗脱。收集的例子: 10mg 上样量, 1g 硅胶 H, 收一馏分; 1-2g 上样量, 50g 硅胶( 200-300 目), 20-50ml 收一馏分。 7 。检测。要更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂底 1-2 个数量级。 8 。送谱。收集的产品旋干,在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体,可过一小凝胶柱,作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱 左右所谓的“硅胶”峰。关于柱层析和 TLC 之我的体会( 转载) 层析和 TLC 是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。这两项技术掌握与否,对于提高实验的效率至关重要。常见的例子是:在柱层析时,由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀(没有填严实) ,使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花,导致分离效果不好。更常见的例子是:层析柱虽然装得不错,但是由于淋洗剂选择不恰当,结果导致几十毫克产品,用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。分离同样的东西,熟手可能只需要半个小时,而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。由此可见,这两项技术掌握与否,对于提高工作效率,减轻工作量,减少有机溶剂的使用,从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。而淋洗剂的选择则是通过 TLC 确定。这里要指出的一点是: TLC 的作用除了跟踪反应进程,检测试剂和原料纯度外,一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。首先谈柱层析: 装柱子(添硅胶)时,有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣。不论干法还是湿法,硅胶(固定相)的上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)的高度一般为 15cm 左右,太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂“走柱子”,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂“走柱子”,一般淋洗剂是采用 TLC 分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度。干法装柱较方便,但最大的缺陷在于“走柱子”时,由于溶剂和硅胶之间的吸附放热(可以用手摸柱子明显感觉到) ,容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如***,二***甲烷更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是,一旦撤去压力,如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来,严重时,整个柱子变花,样品不可能平整地通过,当然也就谈不上分离了。解决的办法是:第一、硅胶一定要天结实;第二、一定要用较多的溶剂“走柱子”,一定要到柱子的下端不再发烫,恢复到室温后再撤去压力。也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂,防止添加溶剂的时候,使得样品层不再整齐。但我的感觉是如果小心上样,添加溶剂,则没有这个必要。上样也有干法和湿法之分:干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后,在加入少量硅胶,拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦,但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂(最好就是展开剂,