文档介绍：称量。200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H。,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以。
2。搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/***体系,就用石油醚拌;如果洗脱剂是***仿/醇体系,就用***仿拌。如果不能搅成匀浆,说明溶剂中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/***,如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置干燥。***仿用无水***化钙干燥,以除去1%的醇。如果样品对酸敏感,不能用***仿体系过柱。
3。装柱。将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3体积石油醚(***仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(***仿)将其冲入柱中。
4。压实。沉降完成后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5。上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。
6。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱。收集的例子:10mg上样量,1g硅胶H,;1-2g上样量,50g硅胶(200-300目),20-50ml收一馏分。
7。检测。要更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
8。送谱。收集的产品旋干,在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体,可过一小凝胶柱,作为送谱前的最后纯化手段。“硅胶”峰。
关于柱层析和TLC之我的体会(转载)层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实
验技术。这两项技术掌握与
否,对于提高实验的效率至关重要。常见的例子是:在柱层析时,由于层析柱中的硅胶
填料装得不均匀(没有填严实),使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花,导
致分离效果不好。更常见的例子是:层析柱虽然装得不错,但是由于淋洗剂选择不恰
当,结果导致几十毫克产品,用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。分离同样的东
西,熟手可能只需要半个小时,而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。
由此可见,这两项技术掌握与否,对于提高工作效率,减轻工作量,减少有机溶剂的使
用,从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。
柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。而淋洗剂的选择则是通过
TLC确定。这里要指出的一点是:TLC的作用除了跟踪反应进程,检测试剂和原料纯度
外,一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
首先谈柱层析:
装柱子(添硅胶)时,有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣。不论
干法还是湿法,硅胶(固定相)的上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)的高度一般
为15cm左右,太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不
好。
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂
“走柱子”,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。
干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不
再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装
的很结实。接着是用淋洗剂“走柱子”,一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例
再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度。干法装柱
较方便,但最大的缺陷在于“走柱子”时,由于溶剂和硅胶之间的吸附放热(可以用手
摸柱子明显感觉到),容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如***,二***甲
烷更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是,一旦撤去压力,如在上
样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来,严重时,整个柱子变花,样品不可能平
整地通过,当然也就谈不上分离了。解决的办法是:第一、硅胶一定要天结实;第二、
一定要用较多的溶剂“走柱子”,一定要到柱子的下端不再发烫,恢复到室温后再撤去
压力。
也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂,防止添加溶剂的时候,使得样品层
不再整齐。但我的感觉是如果小心上样,添加溶剂,则没有这个必要。
上样也有干法和湿法之分:干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后,在加入
少量硅胶,拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻
烦,但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂(最好就是展