文档介绍：第十章 高效液相色谱法
第一节 固定相和流动相 第二节 高效液相色谱仪 第三节 液-固色谱法 第四节 化学键合相色谱法 第五节 离子交换色谱法 第六节 尺寸排阻色谱法 第七节 分离方式的选择及应用
high performance liquid chromatograph,HPLC
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色谱法分类示意图
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概述
高效液相色谱法是在气相色谱和经典液相色谱的基础上70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术。
现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率 和实现了自动化 操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。
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一、HPLC与经典LC区别
主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段
1．经典LC：仅做为一种分离手段
柱内径1~3cm，固定相粒径>100μm 且不均匀
常压输送流动相
柱效低（H↑，n↓）
分析周期长
无法在线检测
2．HPLC：分离和分析
柱内径2~6mm，固定相粒径<10μm（球形，匀浆装柱）
高压输送流动相
柱效高（H↓，n↑）
分析时间大大缩短
可以在线检测
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二、HPLC与GC差别
相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测
主要差别：分析对象的差别和流动相的差别
1．分析对象
GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，
高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及
高聚物的样品不可检测
占有机物的20%
HPLC：溶解后能制成溶液的样品，
不受样品挥发性和热稳定性的限制
分子量大、难气化、热稳定性差及高分子
和离子型样品均可检测
用途广泛，占有机物的80%
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2．流动相差别
GC：流动相为惰性气体
组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用
HPLC：流动相为液体
流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
改善分离度增加了因素，对分离起很大作用
流动相种类较多，选择余地广
流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用
选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相
可以增大分离选择性
3．操作条件差别
GC：加温操作
HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）
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第一节 固定相和流动相
一、固定相
二、流动相
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一、固定相
1. 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分
为刚性固体和硬胶两大类。
（1）刚性固体以二氧化硅为基质，可承受
108 ～ 109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度
不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团，可
扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。
（2）硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它
由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为
108Pa。
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2. 固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。
（1） 表面多孔型固定相
它的基体是实心玻璃球，在玻璃球外面覆盖一层
多孔活性材料，如硅胶、氧化硅、离子交换剂、分
子筛、聚酰***等。这类固定相的多孔层厚度小、孔
浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较
大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达到
平衡，较适合做常规分析。由于多孔层厚度薄，最
大允许量受到限制。
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