文档介绍：第二十六章酶促反应法测定生物化学物质
贵阳医学院潘卫
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教学目标与要求
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掌握
酶促反应法测定生物化学物质定义、分类及其应用原理；UA、BIL、尿素、肌酐、葡萄糖、糖化血清蛋白、TG、TCH、HDL-C、LDL-C、TBA酶促反应法测定的原理及其优缺点与注意事项。
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熟悉
酶促反应法测定其它生物化学物质的原理及其优缺点与注意事项。
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了解
上述酶促反应法测定生物化学物质的方法学评价，以及其方法的历史演变。
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主要内容
酶反应前后光吸收变化测定法
脱氢酶指示系统测定法
过氧化物酶指示系统测定法
酶循环测定法
酶激活和酶抑制测定法
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第一节酶反应前后光吸收变化测定法
一、血清尿酸测定
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利用吸光度的
差值计算
物质的
含量
二、血清胆红素测定
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尿酸（UA）的酶法测定
包括尿酸氧化酶法、尿酸酶紫外法、尿酸氧化酶传感器检测法等。由于各种方法受试剂、仪器等不同的影响，各方法之间的检测结果偏差较大，结果之间缺乏可比性。目前，临床上主要采用尿酸氧化酶法和酶紫外法测定。
一、血清尿酸（UA）测定
尿酸氧化酶法
根据血清尿酸在尿酸酶的作用下生成尿囊素及H2O2，生成的H2O2与4－AA和TOOS在POD的作用下最终生成紫红色的醌亚***，其颜色深浅与尿酸含量成正比。
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尿酸紫外法
利用尿酸在282-292nm处有特异吸收峰，在尿酸酶作用下，生成产物在此波长范围无吸收峰，因此，在此波长下测量酶作用前后的吸光度之差，便可计算血清尿酸的含量，该法为目前临床实验室的最佳方法。
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②本方法需要高质量石英比色皿，在使用紫外分光光度计前需对其波长进行校正，还要注意控制反应条件即温度、时间及溶液的pH值等；
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③自动生化分析仪通常不具备290nm左右的检测波长，因而该法在临床实验室基本没有采用。
①尿酸酶紫外法的特异性和抗干扰性好，标本用量少，无需制备无蛋白滤液，而且方法简便快速；
血清尿酸（UA）测定
方法性能评价
二、血清胆红素测定
胆红素氧化酶法
胆红素呈黄色，在450nm处有最大吸收峰，胆红素氧化酶催化胆红素氧化形成胆绿素，随着胆红素被氧化，胆红素在450nm处吸光度下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测450nm吸光度的下降值反映的是总胆红素的含量。
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②该法解决了长期以来用重氮反应法测定胆红素条件的不同，包括试剂种类和浓度不同以及反应时间不同而造成测定值变异大的问题；
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③特别是对于CB，由于 BOD仅对血清CB 进行选择性氧化, 而不对δ-胆红素和UB 发生氧化反应, 因此反应具有较好的特异性。
①酶法特异性高，重复性较好；
血清胆红素测定
方法性能评价