文档介绍：西南大学
硕士学位论文
家蚕低分子量热激蛋白基因克隆、表达及功能研究
姓名:刘彬斌
申请学位级别:硕士
专业:遗传学
指导教师:鲁成
20070501
家蚕低分子量热激蛋白基因克隆、表达及功能研究摘要指导教师:鲁成教授遗传学专业硕士研究生:刘彬斌本研究基于家蚕基因组数据对家蚕翊鼢基因进行系统的分析,克隆家蚕颍刑家蚕是人类利用较早的昆虫,它既是重要的经济昆虫,也是重要的模式生物。低分子量瑂且恢衷谏锝缙毡榇嬖诘牡鞍字剩瑂不仅在关【啊俊2煌镏謘在序列和大小上存在很大的差异,但他们都有一个保守的褰峁也蟬基因的生物信息学分析通过生物信息学分析方法,在家蚕基因组中一共找到个颍个基冈与已知子结构,。,舻晶体蛋白功能区长短不一,长度约~个氨基酸残基。也蟬基因表达特性表达,蛟谧橹浯嬖种表达方式和在蛹蛾时期存在直泶锓绞健<负跛热刺激实验结果表明蛟诜切财忍跫麓嬖谝欢ǖ谋泶锪浚⑶野樗孀偶也生长发育的全过程,但在热刺激胁迫下虻谋泶锪看蟠筇岣撸砻魅却碳ば财认摘要热激蛋白应激条件下高效表达,在正常状态的细胞中也广泛存在【”,参与一些重要的细胞生理活动。纳锕δ堋嵌嘌模稍銮肯赴阅婢车哪褪苣芰突指茨芰Γ涞狈肿影槁拢近来的研究还表明,褂肷锏恼Iぁ⒎⒂敕只⑾赴谛藕糯ǖ己陀宰;域‘”。为了系统的研究家蚕正酪丹基因的分布特点,基因结构、表达特性以及δ艿取外表达并鉴定鞍坠δ堋Q芯拷峁缦拢的家蚕蛐蛄邢嗤个是新发现基因。个蛑兄挥个基因含有内含莘治龊突蛐酒峁砻鳎杭也蟬基因在家蚕正常生长发育过程中都存在蛟谏诚僦懈弑聿⑶掖菩鄄钜烀飨浴蚕体能作出应激反应。
刈楸泶镏柿5墓菇ㄒ约皃鯺啦质粒的诱导表达检测及功能研究也系头肿恿咳燃さ鞍谆虻目寺∫约凹也蟬系统进化分析类群中的基因是在物种分化以后通过基因的复制形成的:其中有趣的是,少数谖镏构建成重组表达质粒,转化到表达菌株,通过诱导重组质粒表达蛋白。在一般的诱导表达条件下瓹、终浓度为⑴嘌,诱导表达蛋白以包涵体形式存在,改变诱导表达条件在,并且两者各占细胞总蛋白的%,有利于对重组蛋白功能的研究。刈榈鞍譝诱导表达蛋白产物经甈治霰砻鳎刈榈癐;.泶锊锏姆肿恿课关键词:家蚕低分子量热激蛋白克隆与重组表达系统进化分子伴侣西南大学硕宦畚根据家蚕基因组的蛄猩杓埔铮寺个昵品缁颍ü庑蜓橹ぃ寺∷玫个虻暮塑账嵝蛄杏爰也匣蜃橹姓饧父龌虻募罨蛄幸恢拢挥腥魏渭罨浠将人类、鼠、果蝇和家蚕鑫镏值膕蛋白序歹口构建系统发生树,从系统发生树可以看出,鳞翅目和双翅目所编码的低分子量热激蛋白分别聚成一类并形成显著相关的群体,间具有较物种内更高的相似性,┗蛐蛄屑渚哂泻芨叩耐葱裕峁贡J兀赡芰鄢崮亢退ǔ崮课镏址只就已经存在。进化分析表明,家蚕慕叵涤胛镏值慕叵荡筇逡恢隆以为表达载体,将基因整个编码区亚克隆到表达载体终浓度为、过夜培养同样得到诱导表达蛋白。经蛋白组分鉴定发现,诱导表达的重组蛋白以可溶和不溶的形式存笥遥胗蒙镄畔⒀Х椒ㄔげ獾玫降慕峁浅N呛稀检测结果表明,重组蛋白与抗体有较强的特异性反应。在高温条件下,重组蛋白能与硫氰酸酶形成稳定的复合物,,起到分子伴侣的作用。
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第一部分文献综述热激蛋白的发现及研究历史热激蛋白分类以及低分子量热激蛋白组成特点自世纪中叶第一次发现热激能诱导果蝇幼虫唾液腺染色体形成新的膨突后旧,进一步研究发现高温能使果蝇的蛋白质合成发生改变,正常的蛋白质合成被抑制,同时启动了一套新的蛋白质合成基因,新合成或增加合成一类应激蛋白,人们称这种反应为热激反应筛呶掠盏己铣傻牡鞍壮莆H燃さ鞍,R院笱芯恐鸾发展到了昆虫,鸟类、哺乳动物、人类以及细菌、酵母等生物。发现从细菌到人类都具有合成热激蛋白的能力,因而认识到热激反应是一个普遍的生物现象门。热激蛋白最初被认为是生物体应答温度升高而表达的蛋白,但是有一些热激基因在无刺激的细胞中也有明显表达,或是在细胞周期的特定阶段产生,或在生物体发育的某些阶段表达。另一重要的发现是:熟激蛋白的许多成员存在于线粒体和叶绿体中,所以热激基因实际上是一个并非所有成员都受热调控的多基因超级家族。年隨先后阐明编码热激蛋白,男蛄校蚪峁辜拔坏悖⑷范ㄊ怯捎诟呷扔跋斓礁没蛑斜J氐纳嫌蔚鹘序列,即热激元件,由此引起热激反应,从而激活该基因中此元件编码转录合成。近几年发现了热激转录因子。最先发现热激蛋白的产生是由高温引起的基