文档介绍：浙江大学
硕士学位论文
金葡菌肠毒素A基因及其突变体表达产物生物学活性研究
姓名:范芳华
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:严杰
20070501
金葡菌肠毒素蚣捌渫槐涮灞泶锊生物学活性研究中文摘要浙江大学医学院硕士研究生导师病原生物学范芳华严杰教授背景和目的葡萄球菌肠毒素薙墙鸹粕咸球菌产生的肠毒素之一,为虮嗦氲个氨基酸组成的多肽。且恢窒妇超抗原,在极低剂量时即可直接与抗原提呈细胞分子和赴乖侗鹗芴黄胃咔缀土Φ亟岷希盏糡淋巴母细胞有丝分裂并促进赴头臝弧蚑吖等多种细胞因子,从而发挥抗肿瘤作用。因此,哂斜豢7⒊缮紫赴⒖怪琢隼嘁┪锏那熬啊H欢琒具有肠毒性,可引起呕吐、腹泻,并导致小鼠死亡。众所周知,多肽或蛋白类毒素的毒性主要取决于分子中的活性基团,利用定位突变技术改变肿又卸拘韵喙鼗钚曰诺陌被嶙成,极有可能获得低或无毒性、保持促淋巴细胞增殖和抗肿瘤活性的槐涮濉本研究中,我们扩增并克隆了不含信号肽序列的全长颍軸分子中肠毒性相关位点预测结果并参考文献,采用引物突变法构建了多个目的定位突变体及其原核表达系统,并根据突变前后目的重组蛋白细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抗肿瘤细胞活性变化对突变体进行了筛选,以期为进一步研发安全有效槐涮逡┪锏类定基础。,浙江大学硕士学位论文
/疍和/∈笃⑾赴鲋郴钚杂实验方法采用高保真氇克隆法,。建立蚣捌涠ㄎ煌槐涮逶吮泶锵低场缀筒阄龇ㄌ岽勘泶锏哪康闹组蛋白,甈ǎ⒍源炕闹刈榈鞍捉型肝龈葱院吐斯2捎肨法测定目的重组蛋白对细胞的细胞毒性。。结果所克隆的蚝塑账嵝蛄杏氡ǖ佬蛄械南嗨菩晕%,,其突变体重组蛋白分别为的及其滞槐涮逯刈榈鞍譺~.琀、/..结论本研究成功地构建了蛲槐涮寮捌涓咝г吮泶锵低常浔泶锊锏南胞毒性均有所降低。由于/痳疍、/疍细胞毒性较低、促脾细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长活性较强,可作为研制升白细胞、抗肿瘤喙匾┪的候选突变体。关键词葡萄球菌肠毒素籗基因/定位突变;原核表达系统/构建;重组蛋白%。对细胞为和/细胞毒性;脾细胞/增殖;肿瘤细胞/抑制痭浙江大学硕士学位论文痬
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金葡菌肠毒素基因及其突变体表达产物生物学活性研究前言浙江大学医学院硕士研究生导师病原生物学范芳华严杰教授一、研究背景生物制药业是一项高新技术产业,目前在科技发达国家发展极为迅猛。生物药品往往对某种疾病有特殊的疗效匦、极低剂量即有明确的临床效果咝、副作是目前国际上药物研发的热点,也是极有前途的制药业新的经济增长点。众所周知,细菌的毒素等代谢产物有各种生物学活性,其中一些生物学活性可被用于治疗人类疾病,例如已用于薮仓瘟粕窬低臣膊〉娜舛舅缶舅睾徒暄蟹⒌用于治疗血栓性疾病的葡萄球菌激酶。除了引起腹泻的肠毒性外,金黄色葡萄球菌肠毒素有很强的促白细胞增殖、抑制肿瘤的作用,可研制成药物用于白细胞减少症、再生障碍性贫血、肿瘤等疾病的治疗【.根据抗原性差异,金黄色葡萄球菌肠毒素个血清型。业已证实,金黄色葡萄球菌肠毒素、和玸哂谐抗原性质,其中和芯拷隙唷、蚐极低剂量时纯纱碳げ溉槎锛叭说腡细胞增殖,并能明显增强赴钚灾钊缡头哦嘀窒胞因子和细胞毒作用,因而具有开发成升白细胞、抗肿瘤药物的可能性【A硪环矫妫各种原因引起的白细胞减少症一直是临床治疗中的难题,肿瘤则是众所周知的死亡率用极小投等特点,与传统的化学药品比较有其明显的优越性。因此。生物制药浙江大学硕士学位论文
二、蚪最高的人类疾病。因此,,葡萄球菌肠毒素具有肠毒性,可引起食物中毒而导致呕吐和腹泻,用于药物开发的可能性受到极大限制。不少学者参照类毒素制备方法从眉兹┗蛭於┐理细菌外毒素使其脱毒沟闷咸亚蚓Χ舅赝讯不能引起腹泻贝侔紫赴增殖、抗肿瘤等活性也随之消失,表明常规脱毒法不能达到使其毒性下降而不影响其它生物学活性的特定目的。国内外均有人直接用葡萄球菌肠毒素来升高实验动物的外周血白细胞,实验结果证实很小剂量时即有明显效果,且出现腹泻情况不多、症状也不严重【.但由于有效剂量与毒性剂量非常接近,接受治疗者也存在个