文档介绍：安徽医科大学
硕士学位论文
人呼吸道合胞病毒微型基因组的研究
姓名:虞结梅
申请学位级别:硕士
专业:医学免疫学
指导教师:何金生
20070501
黜中英文缩略词表已丙基硫代母肴樘擒英文缩略词英文全称中文名称氨基酸人呼吸道合胞病毒氨苄青霉素过硫酸铵碱基对绿色荧光蛋白二乙基焦碳酸盐养液二甲基亚砜二硫苏糖醇溴化乙锭埃希氏大肠杆菌B计鹗贾罩剐藕乙二胺四乙酸胎牛血清安徽医科大学硕士毕业论文一一一虞结梅牛血清白蛋白·改良的—舡母强
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学位论文作者签名:枷日期:衄何力多叩啦佤学位论文作者签名:忪肜蠲、\埝日期:幽了心·毫学位论文独创性声明学位论文使用授权声明将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅,有本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。,使用学位论文的规定。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版,有权权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索,有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。:日期:
安徽医科大学硕士毕业论文一虞结梅人呼吸道合胞病毒微型基因组的研究摘要琑堑贾掠び儿严重下呼吸道感染的最重要的病毒病原,目前尚无有效的防治方法。利用病毒反向遗传学操作获得的减毒畈《荆哂形榷ǖ陌踩院土己玫拿庖咴性,用于制备呙缬薪虾玫那熬啊8眉际醯墓丶谟谑紫鹊玫胶姓霾《基因组的感染性克隆,然后在培养细胞中重新拯救出活病毒。蜃为单股负链<由疃云浠蜃楦粗铺匦缘娜鲜叮跼拯救的必要知识,拟先尝试构建微型基因组,即在B计鹗己椭罩剐藕胖洳入报告基因或较短的病毒基因组片段,两端为病毒粗谱B妓匦璧牟《厩导序列和尾随序列等调控序列,构成来源的微型基因组,与表达辅助蛋白、、闹刈橹柿9沧H净蛞訰病毒作为辅助病毒在细胞内进行复制和转录,通过鉴定报告基因的表达即可初步鉴定所建立的微型基因组的功能。酆厦将含有病毒微型基因组的重组质粒在细胞内转录合成病毒的基因组1狙芯恐荚谔教諸B枷低及功能,并进一步构建携带增强型绿色荧光蛋白虻腞微型基因组重组质粒,通过转染可表达/赴担⒁訰作为辅助病毒观察的表达情况,明确⑿突因组的功能,为研究腥拘詄於ɑ 方法:根据编码幕蛐蛄校杓埔欢砸隕引物。,以该D0澹应用际酰┰鯰ǔせ颍屑湓靥褰淇寺≈琳婧吮泶镌靥.。与此同时,将靥迩邢碌腡B际侗鸬闹罩剐藕/上切下的基因克隆至目的:人呼吸道合胞病毒目前常用腂蚗盖形坏愕琓痛觩琓
安徽医科大学硕士毕业论文⋯虞结梅结果:成功构建了真核表达载体.”肿椭刈樵靥,且保证位于启动子与洹=ɑ竦玫牧礁鲋刈橹柿9沧H綛螅üü庀晕⒕倒鄄霦谡婧讼赴诘谋泶锴榭觥M保据文献获得B几粗剖彼璧淖钚∷呈阶饔迷<醋B计鹗藕藕妥B贾罩藕乓约盎蜃槠舳敕椿组的启动子蛄小I杓坪眯藕判蛄械乃承虿⒃谄渲幸攵嗫寺∶盖形坏悖命名为,基因合成得到的,以该段序列为模板合成两对分别在上下游带有启动子的引物,同时在启动子端引入盖形坏悖蠵,得到的产物分别命名为虶,之后将这两段序列克隆入靥澹并进一步将基因定向克隆至其中得到两个含有⑿突蜃榈闹刈樵靥澹分别命名为疓/和疓/。为验证这两个重组载体中⑿突蜃榈墓δ埽ü侍宸ㄗH綛/赴担徊嚼肦作为辅助病毒提供转录和复制必须的所有功能蛋白,笤诘怪糜ü庀晕镜下观察报告基因的表达情况。疎疶。在共转染赴螅ü庀晕⒕迪驴晒鄄斓紼泶的绿色荧光。成功构建含有⑿突蜃榈膒/疎疓/载体,转染,赴訰作为辅助病毒,倒置荧光显微镜下观察到/赴泶锫躺ü狻结论:./稍谡婧讼赴鸅内表达ü隩舳子和南嗷プ饔茫迪至藀//蠩虻淖B技氨泶铩构建的带有⑿突蜃榈闹刈樵靥澹赗的辅助下可实现的成功表达,微型基因组具有《咀B己透粗频墓δ埽=徊降腞反向遗传学操作提供了坚实保障。关键词:呼吸道合胞病毒⑿突蜃門酆厦冈銮啃吐躺ü獾鞍细胞。
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