文档介绍：第七章高效液相色谱法一、概述二、液相色谱分离模式三、高效液相色谱仪四、高效液相色谱固定相高效液相色谱法( HPLC )是 20 世纪 60年代末 70 年代初发展起来的一种新型分离分析技术,随着不断改进与发展,目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上,引入了气相色谱的理论, 在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器, 因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。一、概述高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。经典色谱:重力加料,流出速度极慢; 高效液相色谱:高压输液设备,流速最高可达10cm 3·min -1 高效液相色谱法与气相色谱法(l)分析对象: 气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物,它们仅占有机物总数的 20% 。对于占有机物总数近 80 %的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质,目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。(2) 流动相: 气相色谱:惰性气体,它对组分没有亲和力, 即不产生相互作用力,仅起运载作用。高效液相色谱法:可选用不同极性的液体,选择余地大,它对组分可产生一定亲和力,并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此,流动相对分离起很大作用,相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数,这为选择最佳分离条件提供了极大方便。 (3) 工作温度: 气相色谱一般都在较高温度下进行的,而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。液固吸附色谱吸附能,氢键异构体分离、族分离,制备液液分配色谱疏水分配作用各种有机化合物的分离、分析与制备凝胶色谱溶质分子大小高分子分离,分子量及其分布的测定离子交换色谱库仑力无机离子、有机离子分析手性色谱立体效应手性异构体分离,药物纯化类型主要分离机理主要分析对象或应用领域亲和色谱生化特异亲和力蛋白、酶、抗体分离,生物和医药分析高效液相色谱法主要类型二、液相色谱分离模式?液—液分配色谱法( LLPC ) ?液固吸附色谱?离子交换色谱?离子对色谱法( IPC ) ?离子色谱法( IC) ?体积排阻色谱 1、液—液分配色谱法( LLPC ) 在液- 液色谱中, 流动相和固定相都是液体,它能适用于各种样品类型的分离和分析,无论是极性的和非极性的,水溶性和油溶性的,离子型的和非离子型的化合物。 A、分离原理液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同,都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同,具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的, 使这种分配平衡可反复多次进行,造成各组分的差速迁移,提高了分离效率,从而能分离各种复杂组分。 M R S M M St tkV Vkc cK ',???