文档介绍：第八节基因工程药物的分离纯化
基因工程药物的分离、纯化非常重要。表达的产物都是多肽或蛋白质。它的制得具有以下
特点:
①表达产物在初始料中含量较低;
②含有大量细胞及代谢产物;
③表达产物稳定性差,易失活变性;
④表达产物的种类繁多、结构不一、活性各异;
⑤对其质量要求纯度高、无菌、无热原。
一、建立分离纯化工艺的根据
⒈含目的产物的起始料的特点
基因工程菌的发酵产物其上游过程的各种因素对分离、纯化工艺有影响。包括:
①菌种的类型及其代谢特性。
②原材料培养基的来源及其质量。
③生产工艺及条件。
⒉物料中杂质的种类和性质。
⒊目的产物特性。
⒋产品质量的要求
二、分离纯化的基本过程
发酵液
细胞分离
胞内产物胞外产物
细胞破碎
固液分离浓缩初步分离高度纯化制剂产品
包含体细胞碎片分离
变性
复性
三、分离纯化的技术
分离纯化的技术要求:
①技术条件温和能保持产物生物活性。
②选择性好,能从复杂的混合物中有效的将目的产物分离,达到较高的纯化倍数。
③收率要高。
④两个技数间能直接衔接,
不需要对物料加以处理。
⑤纯化过程要快,满足高
生产率的要求。
⒈细胞破碎与固液分离
⑴细胞收集: 离心法、膜分离法。
⑵细胞破碎:机械破碎法、非机械破碎法。
⑶固液分离
⒉目的产物的分离纯化
目的产物含有大量杂质必须进行分离纯化。
蛋白质分离纯化方法的设计根据其分子的理化性质和生物学特性来决定。
产物特性作用
等电点决定离子交换种类及条件
相对分子量选择不同孔径的介质
疏水性与疏水、反相介质结合的程度
生物特异性决定亲和配基
溶解性决定分离体系及蛋白浓度
稳定性决定工艺采用温度及流程时间
⒉目的产物的分离纯化
目的产物含有大量杂质必须进行分离纯化。
蛋白质分离纯化方法的设计根据其分子的理化性质和生物学特性来决定。