穿心莲内酯调控鸡致病性大肠杆菌群体感应系统的机制研究.pdf

文档介绍：穿心莲内酯调控鸡致病性大肠杆菌群体感应系统
的机制研究
Study on the mechanism of Andrographolide interfering
quorum sensing of avian pathogenic Escherichia coli






作者姓名：郭 勋
专业名称：临床兽医学
指导教师：付本懂 副教授
学位类别：农学硕士
答辩日期：2015 年 6月 5 日
中文摘要
穿心莲内酯调控鸡致病性大肠杆菌群体感应系统的机制研究
鸡大肠杆菌病是由鸡致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli，
APEC）引起的一种局部或全身性疾病，一年四季均可爆发，可导致败血症、气
囊炎、输卵管炎、蜂窝织炎等多种症状。APEC 含有 171 个血清型，其中 O78
是亚洲最常见血清型之一。APEC 含有许多毒力因子，包括摄铁螯合蛋白 D
（IucD），铁调节蛋白 2（Irp-2），1 型菌毛 A（FimA），1 型菌毛 C（FimC），P
型菌毛 C（PapC），温度敏感血凝素(Tsh)，溶血素 E（HlyE），血清存活因子（Iss），
外膜蛋白 A（OmpA）以及自转运空泡毒素（Vat）等。这些毒力因子与细菌铁摄
取、代谢、黏附和侵入以及血清生存有关，而且这些毒力因子的表达可能与群体
感应（Quorum sensing，QS）的调控密切相关。APEC 感染开始于上呼吸道，通
过破坏气-血屏障进入血液循环而到达全身，最终导致败血症的产生。其中鸡肺
II 型上皮细胞在维持气-血屏障功能方面具有重要的作用，是 APEC 突破气-血屏
障的关键环节。穿心莲内酯（Andrographolide）是穿心莲的主要活性成分之一，
具有抗炎、抗菌和抗病毒活性。此外，穿心莲内酯对绿脓杆菌 QS 系统具有抑制
活性。因此，本研究我们主要探讨在鸡致病性大肠杆菌 O78（APEC-O78）造成
鸡肺 II 型上皮细胞损伤过程中，QS 系统的自诱导信号分子 2（autoinducer-2，
AI-2）所发挥的作用；并初步分析穿心莲内酯是否能够通过干扰 APEC-O78 的
QS 系统抑制 APEC-O78 对鸡肺 II 型上皮细胞的损伤作用。
首先，通过收集 APEC-O78 上清，并与的哈维弧菌 BB170（Vibrio harveyi
BB170，V. harveyi BB170）共培养，检测 V. harveyi BB170 发光间接检测 AI-2 的
含量。结果发现，鸡致病性大肠杆菌 APEC-O78 具有分泌 AI-2 的能力，发光量
与接种的 APEC-O78 上清量及共培养时间具有正相关性。APEC-O78 分泌 AI-2
的量随其生长曲线发生改变，对数期 AI-2 分泌迅速上升，对数末期达到最大，
但进入平台期后，AI-2 分泌量迅速下降，直至衰亡期。
在鸡致病性大肠杆菌黏附鸡肺 II 型上皮细胞的模型基础上，我们采用乳酸
脱氢酶活性（Lactate dehydrogenase，LDH）检测法、台盼蓝拒染实验、涂板法、