文档介绍：DNA多聚酶链式反应扩增DNA片断
课题2
1、多聚酶链式反应的概念
一、课题背景
2、多聚酶链式反应的应用: 的诊断、、、和DNA 等各方面。
遗传疾病
刑侦破案
古生物学
基因克隆
序列测定
1、DNA分子的组成成分和结构
DNA ,每个基本单位是由一分子的、一分子的、和一分子的构成。
脱氧核甘酸
4
磷酸
碱基
脱氧核糖
?
那么DNA分子的平面结构怎样呢?
二、基础知识
2、DNA分子复制的过程
参与的组分
在DNA复制中的作用
解旋酶
打开DNA双链
DNA母链
提供DNA复制的模板
4种脱氧核苷酸
合成子链的原料
DNA聚合酶
催化合成DNA子链
引物
使DNA聚合酶能够从引物的
3′端开始连接脱氧核苷酸
解旋酶
DNA母链
4种脱氧核苷酸
DNA聚合酶
引物( RNA)
打开DNA双链
模板
合成子链原料
催化子链合成
使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸
思考:3、体内DNA复制的条件是什么? 体外扩增DNA 如何提供相似环境?
变性( 80-100℃)
Taq聚合酶(耐高温)
20—30个核苷酸构成DNA或RNA
DNA双链
单链
变性(加热80-100℃)
复性(缓慢冷却)
4、DNA 分子的热变性原理:
变性的目的:
复性的目的:
解开双链
有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合
(一) 、PCR技术的原理
利用DNA分子的热变性原理,通过控制温度来控制双链的解聚与结合,从而完成体外DAN分子的扩增。
体外DNA复制的条件: 四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、模板;缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。
复制的方向:子链的5′端向 3′端延伸。
(一)、PCR技术原理
PCR
参与的组分
在DNA复制中的作用
高温变性
解旋酶
打开DNA双链
DNA母链
提供DNA复制的模板
4种脱氧核苷酸
合成子链的原料
Taq酶(耐高温)
DNA聚合酶
催化合成DNA子链
20-30个核苷酸构成DNA或RNA单链
引物
使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
(二)、PCR的反应过程
每个循环包括:变性——复性——延伸
从第二轮循环开始,上一次循环的产物也可以作为模板参与反应,并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合,进行DNA的延伸,这样,DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数扩增。
DNA双链反向平行
3′
5′
5′
3′