文档介绍：临床基因扩增检验实验室工作规范
临床基因扩增检验实验室工作规范
临床基因扩增检验实验室工作规范
临床基因扩增检验实验室工作规范
为使基因扩增检验技术有效地应用于临床，更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务，保证检验质量，特制定本规范。
一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其管理
临床基因扩增检验实验室的规范化设置详见《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发［20０２]10号文）附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》.为避免污染，必须严格遵循《临床基因扩增检验实验室设置标准》设置临床基因扩增检验实验室。
,以避免设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区，避免发生交叉污染。在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服，，当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出.
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因，因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
（一）试剂贮存和准备区
下述操作在该区进行:贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
临床基因扩增检验实验室工作规范
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贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过产物分析区。在打开含有反应混合液的离心管或试管前，,并在本区内制备成所需的贮存试剂。当贮存试剂溶液经检查可用后,应将其分装贮存备用，避免由于经常打开反应管吸液而造成污染。
。为避免因单次反应取液而频繁的冻融主贮存试剂,。
主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适用性和稳定性通过预试验来检查,评价结果必须有书面报告。对于”热启动"技术（在第一个高温变性步骤后加入酶),聚合酶也可不包含在主反应混合液中。
在整个本区的实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。
严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理.
工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本工作区的实验台表面应可耐受诸如次***酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外灯（254nm波长），在工作完成后调至实验台上60～，对紫外线损伤不敏感,因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间，。
（二)标本制备区
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下述操作在该区进行：临床标本的保存,核酸（ＲNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定ＲNA时cＤNA的合成.
要正确使用加样器。由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。，加入待测核酸后，,必须有明确的样本处理和灭活程序.
用过的加样器吸头必须放入专门的消毒（例如含次***酸钠溶液)容器内。实验室桌椅表面每次工作后都要清洁，实验材料（原始血标本、血清标本、提取中的标本与试剂的混合液等)如出现外溅,则必须分别处理并作出记录。
对实验台适当的紫外照射(25４nm波长，与工作台面近距离）。
样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取方法,可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价。
用于RNA扩增检测的样本制备好以后,应立即进行ｃDＮA合成,因为ｃDNA链较ＲNA稳定，保存相对容易。为保证逆转录反应的需要,应在标本制备区设置一个以上的温育装置。
cDNＡ合成的理想温度依所使用的酶而定，倾向于使用一步法：即使用在扩增反应缓冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的DNA聚合酶进行逆转录，其较ｃDNA合成后再开盖以调节缓冲液或加入聚合酶进行扩增发生污染的可能性降