文档介绍：海洋微藻的细胞操作
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海洋微藻细胞操作的意义
微藻因为其结构简单和易于培养等特点，成为原生质体制备、再生和增殖、细胞融合以及细胞工程等细胞操作和基因工程研究的极好材料。
绝大多数海洋微藻有细胞壁，其细胞操作收到了限制。因此，海洋微藻细胞操作的第一步是去除细胞壁，获得原生质体。
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通过原生质体进行细胞操作和遗传饰变的要点概况成为：
（1）原生质体的分离
（2）原生质体的培养及再生
（3）细胞融合
（4）把外源遗传物质、细胞器或微生物导入原生质体
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海洋微藻细胞操作研究的历史与现状
50年代末期，Fuhs利用丝状体蓝藻制备得到原生质体。70年代其他种类的原生质体的制备也获得成功。这些微藻原生质体分离成功为海藻原生质体分离和培养研究提供了宝贵的基础资料，为80年代大型海藻原生质体分离和培养工作的活跃开展奠定了宝贵的基础。
从80年代开始，微藻原生质体分离、培养以及细胞融合的研究逐渐向大型海藻转移，这种研究重点的转移似乎可以说明，大型海藻的遗传饰变更加困难和复杂，在理论和实践上有更多的问题需要解决。
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微藻细胞操作的有关问题
微藻细胞操作的材料应具备下列特征
、健康

（如抗生素的耐性）
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细胞操作的全过程应保持在细胞的正常生理状态，这在再生和增殖阶段更为重要。需要注意的要点是：

的控制，特别是外界条件如：温度、光照、盐度、PH、和处理时间等的控制

5、原生质体的纯化方法及纯度
6、不同研究目的的不同原生质体化程度。
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在以海洋为材料的的各种研究中，常常要求培养物是单种和无菌的。为实现这一目的，合适的分离和纯化技术是必需的。
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藻的采集
藻体的最初来源一般是采自自然环境。浮游藻可用浮游生物网采集和浓缩。附着的和丝状体种类可以从礁石、叶状体或其他大型藻类上刮取。当藻种采集后，必需在最短的时间内进行观察、鉴定和分离，应为有一些重要的微藻种类在几小时后可能开始解体。
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分离方法

选直径较细（约5毫米）玻管，在火焰上加热，待快熔时，快速拉成口径极细的微吸管。将稀释适度藻液水样，置浅凹载玻片上，镜检。用微吸管挑选要分离的藻体，认真仔细地吸出，放入另一浅凹载片上，镜检这一滴水中是否达到纯分离的目的。如不成功，应反复几次，直至达到分离目的为止。然后移入经灭菌的培养液中培养，一般在每个培养皿中接20～30个个体。从分离出少量细胞扩大培养到200毫升的培养量，如硅藻一般需20天以上。为了较长时期保存藻种，可将分离到的藻种用青霉素（1000～5000单位或链霉素（20ppm）处理后，获得较纯藻种。
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相当简捷的技术，可用来分离和纯化采集的藻样。用离心洗涤法洗8~9ml藻样，最后离心一次后，在离心管中留2ml上清液，其余倒掉。将毛细管通过棉塞插到离心管的底部，将离心管固定于滴定台上。将压缩空气通过一滴管吹出并从离心管中的毛细管的顶端通过。离心管中的悬浮液会被吸出并形成细雾。将一灭菌的琼脂培养基平板迅速通过细雾，距离大约为25cm左右。盖好培养皿，至于合适的光照和温度下培养。经几天生长后，可用毛细滴管将没有细菌和真菌污染的单细胞或藻落挑出移入新鲜培养液中。
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