文档介绍：上海交通大学
硕士学位论文
替诺福韦阳离子脂质体的制备和细胞摄取研究
姓名:姚彦斌
申请学位级别:硕士
专业:药剂学
指导教师:徐宇虹
20070201
上海交通大学硕士学位论文
替诺福韦阳离子脂质体的制备和细胞摄取研究
摘要
替诺福韦为核苷类药物,具有较强抗 HIV,HBV 活性。为提高替诺福韦的
疗效,降低肾毒性,本课题采用一种新颖的方法制备替诺福韦脂质体,以掩盖其
负电性,提高生物利用度。迄今为止,国内外尚未见到有关替诺福韦脂质复合物
的研究报道。
在课题中,我们采用薄膜水合法制备空白脂质体,用挤压法控制粒径。缓慢
滴加适量乙醇,随后滴加替诺福韦溶液,共孵育后透析除去乙醇。建立了高效液
相测定脂质体及水相溶液中替诺福韦含量的方法,用 Sephadex 凝胶柱过滤法分
离替诺福韦脂质体和游离替诺福韦,测定包封率。此法简便、选择性强、重现性
好。以包封率为主要指标,对不同处方和制备方法进行评价。对影响包封率较大
的因素进行单因素分析,筛选出最佳处方为药脂比 ,脂质处方
DSPC:CHOL:DMTAP: Cerebrosides: DSPE-PEG(6:3:2:1:,摩尔比),包封率为
±%。用 PCS 仪测定粒径分布及表面电位,其平均粒径为 ±,
多分散系数为 -,Zeta 电位为 31±5mv。脂质体在 4℃ HEPES 缓冲体
系保存稳定性超过五周。
进一步地,我们尝试在脂质体处方中加入半乳糖基及 PEG 修饰的脂质,以
SMMC7721 细胞为模型,研究脂质体处方对肝实质细胞摄取替诺福韦的促进作
用。建立了液相质谱联用检测细胞样品中替诺福韦含量的方法,方法灵敏度高,
快速。结果表明,修饰的脂质体处方较游离药物进入肝细胞的浓度明显提高,且
时间延长,说明替诺福韦脂质体具有一定的长循环性和靶向性。用 MTT 法考察
细胞毒性,当替诺福韦脂质体浓度在 20µg/mL 下时无明显毒性。
以 细胞为模型,初步考察替诺福韦脂质体抑制 HBV 的作用。用
ELISA 法考察培养液及细胞中的 HBsAg 浓度。结果表明,替诺福韦脂质体能较
好抑制 HBsAg 表达,与拉米夫定对照组比较,效果优于对照组或相当。
关键词:替诺福韦,阳离子脂质体,包封率,细胞摄取,抑制作用
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上海交通大学硕士学位论文
CATIONIC LIPOSOME FORMULATIONS OF
TENOFOVIR AND THEIR ROLE IN ENHANCING
HEPATOCYTE UPTAKE
Abstract
Tenofovir, a nucleotide analogue of adenosine monophosphate, has potent
inhibitory activities against human immunodeficiency virus as well as hepatitis B
virus. In order to enhance the therapeutic efficacy of tenofovir in treating Chronic
HBV infection and reduce nephrotoxicity, we attempted to develop a novel liposome
formulation that can deliver the drug more efficiently into hepatocytes.
For preparing the liposomal formulation, ethanol was added to blank liposome
solution with vigorous mixing to reach the final concentration 30%(v/v). Tenofovir
solution was then slowly added under vortexing and the mixture was incubated for 1h
and dialyzed to remove the ethanol. The tenofovir encapsulated liposomes and the
free drugs were separated by Sephadex column filtration and ass