文档介绍：重组基因的导入和鉴定
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构建重组体DNA是分子生物学常用技术。它把经过处理的、具有匹配末端的外源片段和载体进行连接,转化感受态细菌后,经生长、筛选或鉴定,获得含目的DNA 的转化菌。本章讨论外源重组基因转入受体细胞的方法，及其重组子的鉴定。
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第一节 基因转移的方法
在确定染色体DNA是遗传的主要载体后的一段较长时间内，人们一直认为虽然生物种类繁多，表型各异，但决定每种生物基因组的DNA是固定的，包括数目固定、位置固定、功能固定的一系列基因。他们的流动性受到十分严格的限制。
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随着遗传学研究的深入，人们逐渐发现细菌的结合、转导、转化、转座等现象，在这些事件中存在明显的遗传物质转移，而这种转移与生物繁殖过程中的遗传物质的转移有显著区别。这些现象后来成为基因工程的基因转移技术。可以用于细菌、真菌和动、植物的基因工程体构建。
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一、基因转移的物理方法
裸DNA直接注射
微粒轰击
电穿孔
显微注射
物理方法
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(1)裸DNA直接注射
1990年Wolff等首次注意到给小鼠直接肌肉注射纯化的DNA或RNA重组表达载体，可使载体上的基因在局部肌细胞内表达，这种表达可持续数日或更长时间，且没有检出注射的外源核酸与宿主染色体整合。
随后的大量动物实验都说明在合适的条件下，DNA接种后可诱导机体产生细胞及体液免疫。于是，作为一种新的基因治疗手段——核酸免疫技术应运而生。
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提高转化效率措施
实验表明，横纹肌细胞(如心肌、骨傍肌)和胸腺滤泡细胞摄取DNA的能力较强，但实际上质粒DNA注射入肌组织后，最多只有1％-2％的肌纤维被转染，DNA的转染效率不仅与质粒DNA的大小、构型有关，还与肌细胞的状态有十分密切的关系。
人们为提高肌细胞摄取DNA的能力采取了一些措施，如在质粒接种前先给予高渗蔗糖溶液、心肌毒柬或麻醉剂(如利多卡因)的预处理。
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