文档介绍：聚丙烯酰***凝胶电泳的操作方法(一) 管型盘状电泳 1. 仪器和设备图 8 管型盘状电泳槽结构 A为正面 B为剖面(1) 分离胶 (2) 浓缩胶 (3) 电极缓冲液 电泳槽:盘状电泳槽国内有很多单位生产,也可因地制宜,自己制造,槽大多为圆筒形(图 9),也有长方形的,上、下槽分别接铂金丝电极,要注意电极到各胶管的距离相等,以保持各凝胶管的电场一致。电泳仪:国内生产的型号很多,如北京六一仪器厂的 DYY- Ⅲ型,电压在 0~ 600v 内任意调节,电流输出 0~ 100mA ,这类电泳仪比较恰当。玻璃管:选择粗细均一的圆玻璃管,内径 5~ 7mm 左右,管长 70~ 100mm 。管口用金刚砂磨平,电泳管的清洁很重要,需浸入 10% ***盐-硫酸溶液中清洗,再用蒸馏水彻底淋洗干净,在管中滴入***而后干燥备用。聚胶架:普通试管架式样,有机玻璃制成,架的孔洞内装一乳胶管,要求乳胶管孔内径与玻璃管外径相同或略小。微量注射器或微量进样器:加样时,由于需样品量极小,作定量分析时要求样品量准确,因此最好用 或 100 μl的微量进样器加样,也可用 50或 100 μl加液器代用。普通注射器:主要用于灌胶和剥胶, 20~ 30ml ,附加 10号不锈钢长针头(约 10cm 长)。其他:日光台灯, PH 计,恒温水浴,烧杯,容量瓶,量筒,试管,漏斗,滤纸,电炉,电子天平等。 ***(Bis) ;丙烯酰***(Acr) ;四***乙二***(TEMED) ;过硫酸铵;核黄素(V B2);三羟***氨基甲烷(Tris) ;蔗糖;甘氨酸;盐酸等。丙烯酰***和甲叉丙烯酰***产品不纯时需要纯化后才能使用。(1) 丙烯酰***纯化法: 70g 丙烯酰***溶于 500ml ***仿中(50 ℃),热滤,滤液凉后置-20 ℃冰箱,即有结晶析出,砂芯漏斗过滤,收集结晶。结晶置于真空干燥器中减压干燥,贮棕色瓶中备用。(2) 甲叉双丙烯酰***纯化法: 12g 甲叉双丙烯酰***溶于 100ml 40~ 50℃***,加热过滤,滤液置-20 ℃冰箱,结晶析出后过滤,并置于真空干燥器中干燥,保存于棕色瓶中备用。 3. 试剂配制(1) 凝胶及缓冲液配制系统有关资料很多,可以根据需要选择适宜的系统。列表 4供参考。最常用的是系统 1(所谓 Davis 的标准状态)。各种贮存液配制后,盛于棕色瓶中,贮冰箱备用。用时需测 PH 值,以检查是否失效。 TEMED 要密封贮藏。过硫酸铵溶液最好现用现配,不宜超过一周。表4 几种适用电泳的聚丙烯酰***凝胶系统<DIV align=center> 系统Ⅰ(PH 值 )(%) 系统Ⅱ(PH 值 )(%) 系统Ⅲ(PH 值 )(15%) 系统Ⅳ(PH 值 )(%) 溶液号组份/100 ml PH值溶液号组份/100ml PH值溶液号组份/100ml PH值溶液号组份/100ml PH值 1 1mol/l HCl Tris 36. 3克 TEMED 15 1mo;/L HCl Tris 克 TEMED 17 1mol/L KOH 醋酸 mlT EMED 20 1mol/l KOH TEMED 2a 丙烯酰*** 克双丙烯酰*** 克 82 丙烯酰*** 克双丙烯酰*** 0. 8克 68 丙烯酰*** 克双丙烯酰*** 0. 4克 21 过硫酸铵 克 3 过硫酸铵 克 16 1NH PO Tris 克 TEMED 18 过硫酸铵 克 22 1N KOH 升醋酸 l 4a 1N HCl 48ml Tris 8克 TEMED 19 1N KOH 醋酸 TEMED 5 丙烯酰*** 克双丙烯酰*** 克 6 核黄素 7 蔗糖 克电极缓冲液: Tris 克甘氨酸 克加水至 1升使用: 10% 稀释液 电极缓冲液: 二乙基巴比妥 2克 Tris 克加水至 1升 电极缓冲液: β- 丙氨酸 克醋酸 克加水至 1升使用: 10% 稀释液 电极缓冲液: 甘氨酸 克醋酸 加水至 1升使用: 10% 稀释液 电极:上槽接负极Θ下槽接正极⊕电极:上槽接负极Θ下槽接正极⊕电极:上