文档介绍：第十周生化实验 影响酶活性的因素
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一、实验目的
观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。
观察唾液淀粉酶在不同底物、温度、pH、和激活剂、抑制剂存在下活性的变化情况。
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二、实验原理
淀粉在唾液淀粉酶（含淀粉酶和少量麦芽糖酶）的作用下被逐步水解成单糖，水解的中间产物遇碘呈现不同的颜色：
淀粉→不同大小分子的糊精→麦芽糖、葡萄糖
蓝色 紫色→暗褐色→红色 不变色
根据水解液和碘反应的颜色，可以判断水解是否已完全，观察底物、温度、pH及激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。
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三、试剂和器材
1. 试剂
新鲜唾液稀释液、1%蔗糖溶液、Benedict试剂、
%淀粉、%淀粉溶液（%NaCl）、
1％***化钠溶液、1％硫酸铜溶液、碘液、
mol/L磷酸氢二钠溶液、 mol/L柠檬酸溶液
2. 器材
恒温水浴锅、4°冰箱、电磁炉(沸水锅)
纸杯、试管、试管架、锥形瓶，pH试纸
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一、酶的特异性
实验目的：了解酶的特异性并掌握酶特异性的检测方法和原理。
实验原理：
酶的特异性是指一种酶只能对一种或一类化合物（此类化合物通常具有相同的化学键）起作用，而不能对别的化合物起作用。
本实验以唾液淀粉酶对淀粉的作用为例，说明酶的特异性，淀粉酶只能催化淀粉水解，对蔗糖的水解无催化作用。
淀粉和蔗糖都无还原性，但淀粉水解产物为葡萄糖，蔗糖水解产物为果糖和葡萄糖，均为还原性糖，糖类的醛基或***基能与Benedict试剂反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
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试管编号
试剂处理
#1
#2
％NaCl的淀粉溶液（mL）
3
－
2% 蔗糖溶液（mL）
—
3
Benedict试剂（mL）
2
2
摇匀，沸水浴煮沸3min
记录观察结果
2、检查试剂
（取2只试管，按下表操作）
1、唾液淀粉酶液的准备
实验者用蒸馏水嗽口，除去食物残渣。然后含一口蒸馏水于口中，轻嗽一分钟，吐入小烧杯中。将其稀释一倍。
操作步骤
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3. 淀粉酶的专一性实验
试管编号
试剂处理
#1
#2
已稀释的唾液溶液（mL）
1
1
％%淀粉溶液（mL）
3
－
2%蔗糖溶液（mL）
—
3
摇匀，置37℃水浴保温15min
Benedict试剂（mL）
2
2
摇匀，沸水浴煮沸2min
记录观察结果
（取2只试管，按下表操作）
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二、pH对淀粉酶活性的影响
实验目的
了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。
实验原理
酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。
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操作步骤
1. 取3个锥形瓶，按下表比例移取磷酸氢二钠溶液和柠檬酸钠溶液，、、。
锥形
瓶号
（mL）
（mL）
缓冲液pH
1
2
3
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2、另取3只干净试管，按下表操作。
试管编号
试剂处理
#1
#2
#3
（mL）
2
-
-
（mL）
-
2
-
（mL）
-
-
2
%%淀粉溶液（mL）
1
1
1
置37 ℃水浴, 每隔1min逐管加入唾液稀释液1 mL，充分摇匀
保温10min，到达保温时间后，每隔1min依次取出
立即加碘化钾－碘溶液/滴
2
2
2
记录观察结果
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