文档介绍：分子生物学实验技术专题电泳技术简介?什么是电泳技术? ?电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中, 于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带, 用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。电泳技术的分类?电泳法可分为自由电泳(无支持体)及区带电泳(有支持体)两大类。?自由电泳包括 Tise-leas 式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。?区带电泳则包括滤纸电泳(常压及高压)、薄层电泳(薄膜及薄板)、醋酸纤维薄膜电泳、非凝胶性支持体区带电泳(支持体有:淀粉, 纤维素粉,玻璃粉,硅胶等)、凝胶支持体区带电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶)等。凝胶电泳技术琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳:实验原理?琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是 D- 半乳糖和 - 脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束,构成大网孔型凝胶。其本身不带有电荷。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。琼脂糖凝胶电泳:实验原理? DNA 分子在碱性缓冲液中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动。? DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有电荷效应与分子筛效应。不同 DNA 的分子量大小及构型不同,电泳时的泳动率就不同,从而分出不同的区带。? DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的 DNA ,也可以分离相对分子质量相同,但构型不同的 DNA 分子。琼脂糖与琼脂的区别?琼脂是由琼脂糖( agarose )和琼脂果胶( agaropectin )组成的。琼脂糖的结构单元是 D-半乳糖和 - 脱水-L-半乳糖;琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。它们的结构相似,但琼脂果胶带硫酸根和羧基组分,凝胶能力差。?在琼脂糖制备过程中需要把琼脂果胶尽量去除,否则琼脂糖有可能存在极微量硫酸根和丙酮酸取代电离基团,就会造成电内渗,电内渗对质点的移动产生影响。质量较好的琼脂糖硫酸根含量比较低,通常在 % 以下,电内渗比较小,通常在 % 以下。?简言之,琼脂糖是从琼脂中精细提取的,有自身独特的性质,所以琼脂糖要比琼脂贵得多。琼脂糖凝胶电泳特点琼脂糖凝胶的配置? ,配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1 × TAE 或 × TBE 。注意:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。? ,在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中,加入准确称量的琼脂糖粉。?注意:总液体量不宜超过三角锥瓶的 50% 容量。? 3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖注意:必须保证琼脂糖充分完全溶解,否则, 会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡,停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。