文档介绍：实验四食品中大肠菌群的测定
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一、实验目的
掌握大肠菌群的原理及其检验方法，以判别食品的卫生质量
了解MPN测定法在食品卫生检验中的意义
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二、实验原理
大肠菌群是指一群在一定培养条件下可发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。
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最近似数测定法（MPN）是指对未知样品做连续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每种稀释液接种3管装有培养基的试管中培养，根据LST初发酵试验以及BGLB发酵证实实验，证实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数。
食品中大肠菌群数以每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。
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三、实验器材
（一）培养基
月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基
（二）实验材料
市售饮料
（三）其他
三角瓶，试管，培养皿，移液管
（四）仪器
超净工作台，电子天平，高压蒸汽灭菌锅
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四、实验准备
（一）配制培养基和试剂（以中央台为单位）
1、配制生理盐水：1000mL
NaCl 水 1000mL
分装：
3个三角瓶（含玻珠）中，225mL/个
9支试管，3支/组，9mL/支
灭菌：
121~126℃灭菌20min
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2、月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基：300mL
分装到27个已装有杜氏小管试管中，10mL/个
包扎（3支一捆），112~115℃灭菌30min
胰蛋白胨 6g NaCl
乳糖 K2HPO4
KH2PO4 十二烷基硫酸钠
水 300mL pH
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3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基：150mL
分装到12个已装有杜氏小管试管中，10mL/个
包扎，112~115℃灭菌30min
蛋白胨乳糖
牛胆粉溶液 30mL %煌绿水溶液 2mL
水 150mL pH
牛胆粉溶液制法：将3g牛胆粉溶于30mL水中，~
BGLB制法：先将蛋白胨、乳糖溶于约100ml水中，加入牛胆粉溶液30mL，调节pH，%煌绿水溶液，最后用水补足到150ml，用纱布过滤后，再分装到试管中。
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（二）其它器具（每个组准备）
移液管 10mL 1支/组
1mL 10支/组
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五、实验步骤
1、样品处理：
以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面，用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4
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