文档介绍：釉醪中山大掌硕士研究生学位论文华支睾吸虫四种抗原基因的克隆、表达及其诊断价值的研究业:硕士研究生:师:答辩委员会主席:答辩委员会成员:病原生物学李靖华二零零五年四月专导中国,肛,
华支睾吸虫四种抗原基因的克隆、表达及其诊断价值的研究摘要专业:病原生物学硕士生:李靖华导师:詹希美教授中山大学中山医学院寄生虫学教研室华支睾吸虫病是由华支睾吸虫引起的~种人兽共患病,广泛流行于东亚地区,包括中国,韩国,日本,俄罗斯,及越南。年最新的报道显示,全世界约有万感染者,其中大约有万在中国。感染华支睾吸虫主要引起肝脏系统的慢性损害,胆管上皮细胞增生、化生甚至癌变,严重影响病人的健康。华支睾吸虫病的诊断是其防治工作中的关键,主要包括病原学诊断和免疫学诊断。临床上以粪便中直接查找到虫卵作为诊断华支睾吸虫病的主要依据。但轻度感染病人,易漏诊。华支睾吸虫虫卵与异形类吸虫卵、猫后睾吸虫卵、横川后殖吸虫卵、灵芝孢子等在形态、大小上极为相似,易误诊。常规免疫学诊断方法虽具有较高的敏感性%~,但特异性不理想,假阳性率在ブ间,这是因为交叉反应缬胙N妗⒎挝娌∪擞サ慕徊娣从或一部分病人治愈后血清抗体仍呈阳性所致。有关统计表明,虫卵阴转半年后,的阴转率仅为%;且感染度愈高,阴转率愈低。如何判断患者是否已治愈、是否被重复感染而需再次治疗是华支睾病防治中急待解决的问题。华支睾吸虫一些重要蛋白的分子生物学研究虽然起步较晚,也已经在基因、基因表达和功能研究方面取得了进展。等报道,蛋白是一种华支睾吸虫特异的流动抗原,可作为鉴别华支睾吸虫现症感染和既往感染;华支睾吸虫、并殖吸虫和后殖吸虫的特异可靠的标志,。且抗原与抗原是血清中与华支睾吸虫四种抗原基州的克隆、表达及其诊断价值的研究中文摘要
研究目的:研究方法:抗体反应的主要抗原。作为一种多功能酶哂薪锨康拿庖咴裕捎于免疫诊断。华支睾吸虫入赘孰腟转移酶定位于虫体的皮层和间质组织,能特异的被感染华支睾吸虫的患者血清识别。蛋白与肝片吸虫、卫氏并殖吸虫、日本血吸虫的无相同的抗原表位。半胱氨酸蛋白酶具有较强的免疫原性,可作为免疫诊断标志物。以上研究为华支睾吸虫病诊断试剂盒的开发提供了重要的参考与启示。通过联合应用几种特异抗原作为诊断抗原础凹ξ簿浦刈榭乖,有望得到敏感性特异性均理想的诊断用抗研究显示,华支睾吸虫病人血清中的抗体包括虸抗体,抗体是最主要的。在固宓难抢嘀校琁固迨嵌坛炭固澹诨迥诖较快,据报道在相当多的寄生虫病如,血吸虫病、钩虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病,病人血清中抗体发挥重要作用,且在虫体消失后抗体水平很快降低。据有关华支睾吸虫固逖抢嗟难芯勘砻鳎琁固逶诓∪擞靡┖罅鲈轮谙失。本课题拟对治疗后虸固宓南踅卸鄄欤窖凹瓤捎糜谡断又可作为疗效考核的抗体指标。综上所述,采用“鸡尾酒重组抗原”具有特异性高、投入少、周期短、操作简单、成分稳定的优点。应用短程抗体作为检测指标可判断现症感染或既往感染。由于直接从华支睾吸虫虫体中分离纯化可用于诊断的蛋白难度较大,因此本研究采用基因克隆和重组表达技术,构建表达华支睾吸虫蛋白、虻脑吮泶锵低常呕泶锾跫云诨竦每捎糜诨Vж何病诊断的重组蛋白的高效表达,并分别研究其诊断价值,为研究既能用于检测又能用于疗效考核的华支睾吸虫病血清学诊断方法提供参考。根据已知的蛋白、鞍住蛋白、基因完整序列分别原。华支睾吸虫四种抗原基因的克隆、表达及其诊断价值的研究中文摘要
结果:发计特异引物,经分别扩增分离蛋白、鞍住蛋白、基因的全长,定向克隆至原核表达载体,构建蛋白、蛋白、鞍住蛟吮泶镌靥澹徊⒆;蟪Ω司鶥越⒎直表达蛋白、鞍住蛋白、重组融合蛋白的工程菌株。优化表达条件,使上述工程菌株高效表达目的蛋白。目的表达产物采用亲和层析法纯化分离。纯化分离的融合蛋白用産癊法研究其诊断价值。鞍住蛋白、鞍住虻娜ǔ腜、测序分析和表达载体拿盖屑ń峁砻鳎罕狙芯砍晒菇鞍住鞍住蛋白、全长的原核表达载体。;竦帽泶镏刈槿诤系鞍椎拇蟪Ω司こ叹阷癐;疊鞍祝、鞍祝疊疊捎对各菌株的表达产物进行分析鉴定,结果显示各表达体系所表达的蛋白、鞍住蛋白、蛋白重组融合蛋白的分子量大小与预期值相符。分析结果显示除蛋白可于血吸虫感染的兔血清有交叉反应,不宜作为诊断抗原外,蛋白、鞍住蛋白可作为诊断用抗原。谟呕泶锾跫掠盏忌鲜鼍甑拇罅勘泶铮泶锊锞缀筒阄龃炕蟮到纯化的重组融合蛋白。肊法检测华支睾吸虫病阳性血清,结果显示,蛋白、白、鞍椎拿舾行苑直鹞%、.ァ%。臣蒲Х治鼋峁砻鳎鞍住蛋白、鞍孜W榉值“鸡尾酒抗原”。%秸呶尥臣学差异,。华支睾吸虫四种抗原基因的克降、表达及其诊断价值的研究中文摘要
结论:关键词:华支睾吸虫;原核表达:鸡尾酒抗原;固澹篒固竦昧丝梢员泶镏刈槿诤系鞍椎拇蟪Ω司こ叹阷鞍祝疊鞍祝疊蛋白/、/。直鹩缮鲜鼍瓯泶锏