文档介绍：中山大学
硕士学位论文
华支睾吸虫MYND-ZF基因的克隆、表达及免疫学功能的初步研究
姓名:王乐旬
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:徐劲
20100531
华支睾吸虫—基因的克隆、表达及免疫学功能的初步研究中文摘要师:徐劲副研究员◇中山大学硕士学位论文专业:病原生物学硕士研究生:王乐旬导北∏獾鍪⒆灾吻⒅毕绞校腥救耸笤际万,且以广东随寄生部位之外的整个胆管上皮的广泛性增生和腺瘤样病变。年拢华支睾吸虫病又称肝吸虫病,是感染华支睾吸虫笠鸬囊恢忠愿蔚ü懿±砀谋湮V饕L卣鞯娜耸薰不技纳娌。成虫寄生于宿主的肝胆管内。寄生于肝胆管内的成虫虫体对胆道可造成慢性损伤,从而引起胆管上皮细胞增生、管壁增厚、管腔局限性扩张及狭窄等胆管的病理改变,临床上可表现为胆道炎症、肝纤维化甚至肝胆管肿瘤。目前,全世界有近蚧Vж何娓腥菊撸饕7植加诙呛投涎堑厍何夜植荚诔省最为严重,感染人数约为颉5鼻埃Vж何娌∫殉晌N夜餍凶罟阋及危害最大的食源性寄生虫病,年卫生部将其列为我国重点防治的寄生虫病之一。大量的临床和实验资料表明:长期感染肝吸虫的患者或其他动物宿主,都伴支睾吸虫被啡衔5ü馨┑闹苯硬∫蜓б蛩兀浞肿踊撇幻鳌R虼耍对华支睾吸虫的致病机制进行研究,特别是对华支睾吸虫感染引起癌变的分子机制的探讨,对深入了解和防治华支睾吸虫病具有非常重大的科学意义和深远的现实意义。华支睾吸虫虻目寺⒈泶锛懊庖哐Чδ艿某醪窖芯
粒文库中筛选出一个型锌指蛋白Ⅵ—基因生物信息学的分析◇中山大学硕士学位论文现,含有锌指结构的蛋白是迄今在真核生物基因组中分布最广的一类蛋白,人类基因组中可能有近サ男蛄斜嗦氪死嗟鞍住K淙欢云溲芯康氖奔洳怀ぃ嚼基于锌脂蛋白在部分癌症发生发展中的作用,本文从华之睾吸虫成虫质制备特异性抗体。锌指是一种重要的结构域,其特点为结构域中的半胱氨酸或氨酸攵鄣男坷胱咏岷洗佣晕艺鄣纬啥潭榷ǖ摹笆种敢谎峁埂含有锌指结构的蛋白称为锌指蛋白。锌指蛋白通过与和蛋白质等相互作用在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中发挥重要作用。锌指结构域最初于年在非洲爪蟾卵母细胞的转录因子中被发越多的研究显示:其质或量的异常变化会导致疾病或肿瘤的产生。如:锌指蛋白耐槐溆肷鯳肿瘤和假***畸形密切相关;的不适宜表达与乳腺癌和卵巢癌的关系密切:与前列腺癌的发生、发展有重要联系等等。通过生物信息学方法在华支睾吸虫文库中发现了型锌指蛋白基因,软件分析预测该蛋白含有一个跨膜区。本实验室多年来从事华支睾吸虫功能基因组学的研究,成功建立了华支睾吸虫质粒文库,为深入探讨华支睾吸虫与胆管癌的相互关系打下了基础。和功能,以期为华支睾吸虫在胆管癌致病机制的系统研究中奠定一定的基础。从华支睾吸虫成虫的文库中筛选出—基因,通过生物信息学相关分析软件预测型锌指蛋白的结构和功能特征。利用基因工程技术对该基因进行原核克隆、表达,,初步推测其可能的生物学功能。华支睾吸虫『虻目寺⒈泶锛懊庖哐Чδ艿某醪窖芯
、◇中山大学硕士学位论文、等对—进行结构和功能的分析,对虳两个软件设计引物,┰龀鯩基因,,利用用纯化后的重组蛋白免疫大鼠,⒔卸嘈蛄械耐葱员榷裕分析该蛋白在进化过程中的规律。。依据目的基因的开放阅读框椭柿盖形坏闾氐悖ü限制性内切酶訮产物和空质粒久盖校肨连接酶连接。然后⑺盖泻筒庑蚣ㄖ刈橹柿!将重组质粒一;酱蟪Ω司鶥疍,在行融合蛋白的纯化。抗体的免疫血清,并对大鼠血清进行预吸附。从麦穗鱼中收集华支睾吸虫囊蚴,通过灌胃感染大鼠,成功后取血,。变化。.华支睾吸虫痩荤嗷虻目寺⒈泶锛懊庖哐Чδ艿某醪窖芯
◇,以甖庖叽笫笱G搴突Vж何娓染病人的血清为一抗,对纯化的猌拿庖咴院兔庖叻从π越蟹析。利用椒ǎ婊∪莼Vж何娓腥菊叩难G澹萑毡狙N虫感染者的血清,份感染肺吸虫感染者的血清,份健康入的血清,比较与成虫粗抗原在诊断上的敏感性,以及与日本血吸虫和肺吸虫感染者血清的交叉反应。通过提取囊蚴、虫卵及成虫阶段的总醋B汲蒫缓笠詄为模板利用特异引物扩增目的基因,了解目的基因在不同时期的表达情况。以抗大鼠血清作为一抗,对华支睾吸虫