文档介绍：微生物生理生化实验实验
一、教学目与要求

1 要求学生了解IMViC试验原理及在肠道菌判定中意义。
2 掌握IMCiV及硫化氢试验操作。
教课时数: 6课时
二、试验原理
★微生物体内多种酶系统控制复杂多样生化反应完成 ; 测定微生物一些酶类有没有、对底物作用是否、反应条件、反应产物及代谢方法都属于生理生化试验内容。
★在培养基内或在培养完成以后加入特定指示剂就可确定所发生生理生化反应类型。
★常见试验: 糖代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、氮源和碳源利用试验及酶试验等。
IMViC是四个生理生化反应英文词第一个字母缩写, I表示吲哚试验（indol test）、M表示***红试验（methyl red test）、V表示伏普反应（Voges-Proskauer reaction, 小写之i使之成为一个可发音单词）、C表示柠檬酸盐试验（citrate test）。这四个试验在肠道细菌判别中常常作为一组常规生理生化试验来进行。
1、吲哚试验（indol test）
含有色氨酸酶细菌, 能分解蛋白质中色氨酸产生吲哚（靛基质）, 吲哚本身没有颜色, 不为肉眼所见, 当加入对二甲氨基苯甲醛试剂后, 形成可见红色化合物, 即玫瑰吲哚
2、***红试验（methyl red test）
肠道细菌可分解葡萄糖产生***酸, 并使***酸深入分解为甲酸、乙酸、乳酸等。对于部分细菌如大肠杆菌、沙门氏菌等, 发酵葡萄糖产酸较多, , 所以可用指示剂***红（～）指示出来。
3、伏普反应（Voges-Proskauer reaction ）
产气杆菌能进行丁醇发酵, 可使***酸脱羧, 生成中性乙酰***甲醇（3-羟基丁***）。在碱性条件下, 乙酰***甲醇可被空气中氧所氧化, 生成二乙酰（丁二***）, 二乙酰再与蛋白质中精氨酸胍基作用, 生成红色化合物, 。
柠檬酸盐培养基是合成培养基, 不含蛋白胨和糖类, 柠檬酸盐为唯一碳源。有细菌如产气杆菌能利用柠檬酸钠作为碳源, 柠檬酸钠为弱酸强碱盐, 被分解利用后使培养基pH值升高, 由中性变为碱性, 可使培养基中指示剂溴麝香草酚蓝（～, 黄色～蓝色）由绿变蓝。
4、柠檬酸盐试验（citrate test）
三、试验器材
恒温水浴锅, 接种针, 接种环, 试管架, 记号笔, 滴管;
蛋白胨水培养基, 葡萄糖蛋白胨水培养基, 柠檬酸盐培养基（西蒙氏培养基）;
***红试剂, , 吲哚试剂, 40% KOH溶液（%肌酸）, ***, 6% α-萘酚酒精溶液;
大肠杆菌, 产气肠杆菌, 枯草芽孢杆菌, 一般变形杆菌。
四、试验步骤
1、培养基制备（略, 已准备）: 蛋白胨水培养基, 葡萄糖蛋白胨水培养基, 柠檬酸盐培养基
2、培养基编号
3、接种: 按要求接种
4、培养: 37℃温箱中培养
5、生理生化反应及观察