文档介绍：二、Y -氨基丁酸的高效液相色谱测定法
本方法适用于保健食品中丫 -氨基丁酸(丫 -aminobutyric acid )的测定。
本方法丫 -氨基丁酸的检出限为10ng。
1•方法提要
Y -氨基丁酸用异硫氰酸苯酯柱前衍生，衍生物采用氨基酸分析柱分离，二元流动相梯度洗
脱，248nm波长下紫外检测器检测，以保留时间定性，以峰面积外标法定量。
2•仪器
高效液相色谱仪，配紫外检测器。
旋涡混合器
3•试剂
本方法除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。
乙腈：色谱纯。
异硫氰酸苯酯乙腈溶液：吸取，加入 40mL乙腈溶解。
盐酸溶液( ):取分析纯浓盐酸 ,加水稀释至1L。
三乙胺-乙腈溶液：15mL三乙胺与85mL乙腈混合而成。
y -氨基丁酸标准品：纯度 %, Sigma公司。
y -氨基丁酸标准溶液：精确称取丫 -氨基丁酸10mg ,置于10mL容量瓶中，盐酸溶液溶解并稀释到刻度，摇匀，得浓度为 1mg/mL的标准储备溶液。将此标准储备液用
ygmL、 ^gmL、 ^gmL、 ^gmL的标准
溶液系列。
醋酸钠溶液：，用作流动相 A。
乙腈-水溶液：乙腈-水(80+20),用作流动相 B。
正己烷。
4 .测定步骤
供试样品溶液的制备
提取：称取适量样品(相当于丫 -氨基丁酸4mg，)，置于100mL三角烧瓶中，加入盐酸溶液()适量，40 C超声提取20min，冷却，转移至100mL容量瓶，加盐酸溶液()至刻度，摇匀，静置，取适量过滤，得样品提取液。
衍生化：,置于5mL具塞试管中，加异硫氰酸苯酯-, 再加三乙胺-,摇匀，放置1小时，然后加入正己烷 2mL,漩涡混合1min，静置，取下层液体作为待测溶液。
标准工作液的储备：精密量取 ygmL、 ygmL、 ygmL、卩/mL的标 mL,分别置于5 mL具塞试管中，同样品进行衍生后，得到浓度为1 ygmL、2 卩/mL、 4 ug/mL、8/mL的标准系列溶液，待上机测定。
（3）色谱条件
色谱柱：Venusil-AA 氨基酸分析柱， , 5 。
流动相：流动相，流动相 B为乙腈-水溶液，采用梯度洗脱方式，时间程序见表 3-11。
表3-11 梯度洗脱时间程序
时间（min）
A (%)
B (%)
时间（min）
A (%)
B ( %)
0
100
0
38
66
34
6
97
3
40
0