文档介绍：硕士学位论文小菜蛾泛素基因克隆、表达与功能分析
中文摘要
小菜蛾 Plutella xylostella(L.)属鳞翅目菜蛾科,是十字花科蔬菜的主要害虫
之一。由于在生产上用药频繁,加之小菜蛾生活史的特殊性,它对多种杀虫剂
都产生了抗药性,已成为世界上最难防治的害虫之一,所以对小菜蛾的抗性机
理研究就显得尤为重要。
Cheng L cDNA 代表性差异分析法(RDA) 筛选出了小菜蛾
抗药性品系和敏感品系间的差异性表达片断。其中 1 个序列与已知泛素基因有
较高同源性。为了进一步研究泛素基因与小菜蛾抗药性形成之间的关系,本实
验克隆了小菜蛾 Plutella xylostella(L.)抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成虫
基因组中分别克隆了泛素基因的编码区,并利用荧光定量 PCR 和 western blot
技术分析不同品系小菜蛾泛素基因的表达情况。主要研究结果如下:
1. 设计一对简并引物,从小菜蛾 Plutella xylostella(L.)抗溴氰菊酯品系和
敏感品系的雌雄成虫基因组中分别克隆了泛素基因的编码区,GenBank 登录号
分别为 EU28778,EU28779,EU28780,EU28781。序列分析表明,该基因的长
度为 228bp,编码的多肽由 76 个氨基酸组成。不同品系和不同性别的小菜蛾泛
素基因的核苷酸序列、氨基酸序列等均存在差异,其中敏感品系雌雄成虫间差
异较大,序列相似性为 %;抗性品系雌雄成虫间差异较小,序列相似性为
%。推测这些差异可能与小菜蛾抗药性的形成有关。
,从小菜蛾
Plutella xylostella(L.)抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成虫 mRNA 中克隆泛
素基因表达片段,GenBank 登陆号分别为: EU860162, EU860163, EU860164
和 EU860165。利用荧光定量 PCR 技术分析不同品系小菜蛾泛素基因的表达情
况,表达量从高到低的顺序依次为:敏感品系雌性样本(SF)、敏感品系雄性样
本(SM)、抗溴氰菊酯品系雌性样本(DRF)、抗溴氰菊酯品系雄性样本(DRM)。
,利用 western blot 技术,并以持家
基因ß-actin 的表达量校正泛素蛋白表达量。结果与实时荧光定量 PCR 的结果
一致,即溴氰菊酯的长期选择压力导致了小菜蛾体内泛素基因表达水平下降。
关键词小菜蛾,溴氰菊酯,泛素
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硕士学位论文小菜蛾泛素基因克隆、表达与功能分析
英文摘要
The diamondback moth, Pluttela xylostella(L.) has e one of the most
destructive pests of cruciferous crops all over the world whose high insecticide
resistance has received much attention to date. The ic basis of resistance to
some synthetic insecticides and Bacillus thuringlensis has been examined in
different Pluttela xylostella populations. But to understand the molecular mechanism
of insecticide-resistant Pluttela xylostella, differentially expressed genes of interest
should be identified, cloned and studied in detail.
In our previous work, we obtained one different expressed sequence with
relatively high homology to the ubiquitin gene as assessed via cDNA
representational difference analysis (RDA). To further study this product, we cloned
ubiquitin ORF sequences identified from both sexes of the deltamethrin-resistant