文档介绍：摘要多不饱和脂肪酸,是细胞结构和功能的重要组成部分,其中丫锹樗,在预防糖尿病,皮肤病等疾病中有重要作用。深黄伞形霉且恢种匾5腉产生菌,对其进行改造得到高产菌株,以及建立一套高效稳定的遗传转化体系对其脂肪酸代谢机制进行研究有重要的意义。本研究根据根癌农杆菌介导瓺转化真菌引起插入突变的原理,建立了深黄伞形霉的高效遗传转化体系,为深黄伞形霉的功能基因组学研究以及筛选高产工业用菌株奠定了基础。越猩罨粕⌒蚊挂糯;墓丶跫胍蛩亟猩秆『陀呕=峁明:农杆菌转化深黄伞形霉的效率明显高于菌株虴淮高山被孢霉舳拥膒/柿5淖;室C飨愿哂带有构巢曲霉启动子的痟质粒,原因可能为高山被孢霉与深黄伞形霉的同源性较强;共培养前对农杆菌用液体培养基痬诱导至.,深黄伞形霉孢子浓度为觯痬涞忍寤旌虾竺棵笸旌液,在℃共培养;Ч罾硐耄苫竦个转化子。这是对于农杆菌介导的真菌遗传转化的首次报道。糜呕玫纳罨粕⌒蚊挂糯;逑刀云浣幸糯;笛楹妥;柿检验。结果表明:平均每个深黄伞形霉孢子可得到—隹钩泵顾乜寺。从获得的深黄伞形霉抗潮霉素克隆中随机抽样,以质粒谐泵顾亓姿嶙R泼基因编码区设计了一对引物琱晓蠵检测,结果参试克隆均扩增到的片段,初步表明用甿遗传转化体系进行深黄伞形霉的遗传转化结果的假阳性率较低。在无潮霉素选择压力的嘌狭=优嘌代后,.プ;拥目钩霉素表型仍然保持稳定,说明该方法得到的转化子较为稳定。在获得的插入转化
子中,随机抽样进行,结果发现办矽因已经成功插入到了深黄伞形霉基因组中去,但是单拷贝插入率较低。酶┡└⌒蚊垢咝ё;逑祷竦昧舜罅狣插入转化子。发现用得到的深黄伞形霉转化子形态与原始菌株差异不大。检测了其中甑牟舅崃浚⑾志蟛糠值耐槐渲瓿鱿至松ぷ纯缓慢,产油量降低的现象,,。,但是甿的棵飨陨仙关键词:深黄伞形霉;;突变株;转化Ⅱ
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学位论文作者签名:瓣渺闕耮南开大学学位论文版权使用授权书本人完全了解南开大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,同意如下各项内容:按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存学位论文的印刷本和电子版,并采用影印、缩印、扫描、数字化或其它手段保存论文;学校有权提供目录检索以及提供本学位论文全文或者部分的阅览服务;学校有权按有关规定向国家有关部门或者机构送交论文的复印件和电子版;在不以赢利为目的的前提下,学校可以适当复制论文的部分或全部内容用于学术活动。经指导教师同意,本学位论文属于保密,在年解密后适用本授权书。指导教师签名:学位论文作者签名:解密时间:年月日各密级的最长保密年限及书写格式规定如下:
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第一章引言第一节丝状真菌转化体系概述,ā康姆椒ń饩隽松鲜鑫侍猓蟠筇了利用肌醇缺陷型对丝状真菌粗糙脉孢菌进行遗传转化【,然而,利用重组丝状真菌在自然界分布广泛,与人类的生产、生活密切相关,在生物工程,医药,植物病理学等领域有着广泛的应用。在生物工程领域,可以利用真菌生产一些重要的代谢产物,如产黄青霉可生产青霉素,里氏木霉缮宋孛福罨粕⌒蚊梢杂美瓷嗖槐ズ椭舅岬取緇挥捎谛矶嗾婢侨死唷⒍锛爸参的病原菌,‘如稻瘟病菌每年可以导致损失大量粮食,所以对于真菌的研究在植物病理学领域有着非常重要的意义,同时,一些真菌也可以作为生防剂控制病虫害的发生;另外,一些有代表性的真菌如构巢曲霉痛植诼鲦呔然箍勺魑DJ缴用于基础性的分子生物学及遗传学的研究。为了有效的利用丝状真菌有益的特性,抑制其对人类不利的一面,对丝状真菌进行更深入的研究,获得更多的关于真菌分子生物学信息成为了让真菌为人类服务的前提和基础。分子生物学技术的发展,尤其是重组际醯姆⒄刮N颐欠掷牖蚝头治龌因的功能、了解真菌提供了一个强有力的工具。蚑在年首次报道术构建真菌遗传转化体系,发展则较为缓慢,其中最主要的原因是目前广泛采用的真菌遗传转化的方法较繁琐,影响转化效率,、醋酸锂转化法、电激法都需要以原生质体作为转化受体,而丝状真菌的原生质体制备过程复杂,成本高且重复性差;利用基因枪法转化虽然操作简单,但会出现大量的假阳性转化子,为后续的筛选工作带来很多不便。另外一个原因是利