以rad51基因为目的基因设计的pcr实验.docx

文档介绍：以Rad51基因为目的基因设计的PCR实验
王佳琳 2019级医学检验技术
一、原理：
在DNA聚合酶和引物的参与下，以靶DNA为模板，按照碱基互补配对原则合成互补链，并对反应产物进行定量和半定量分析。本实验选择Rad51基因为扩增对象。
二、试剂：
1、目的基因Rad51；
2、目的基因Rad51特异引物：引物用无菌去离子水配制成浓度1mmol/L的储存液，实验时再稀释至工作浓度。
3、10×PCR缓冲液：100mmol/L Tris-HCl（pH=），500mmol/L KCl，%明胶和15mmol/L MgCl2。一般酶都有自带10×缓冲液。
4、脱氧核苷三磷酸（dNTPs）混合液：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mmol/L。
5、Taq DNA聚合酶。
6、其他电泳和Trizol法相关试剂。
三、器材：
DNA扩增仪、台式高速离心机、凝胶成像分析系统、琼脂糖凝胶电泳系统、移液器及吸头、PCR反应管、漩涡混匀器、锥形瓶、微波炉以及Trizol法相关器材。
四、操作步骤：
1、基因序列与编码序列的查找
在NCBI查找Rad51的基因序列及编码序列，如下：
ATGGCAATGCAGATGCAGCTTGAAGCAAATGCAGATACTTCAGTGGAAGAAGAAAGCTTTGGCCCACAACCCATTTCACGGTTAGAGCAGTGTGGCATAAATGCCAACGATGTGAAGAAATTGGAAGAAGCTGGATTCCATACTGTGGAGGCTGTTGCCTATGCGCCAAAGAAGGAGCTAATAAATATTAAGGGAATTAGTGAAGCCAAAGCTGATAAAATTCTGACGGAGTCTCGCTCTGTTGCCAGGCTGGAGTGCAATAGCGTGATCTTGGTCTACTGCACCCTCCGCCTCTCAGGTTCAAGTGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCCGAGTAGTTGGGACTACAGGTGGAATTGAGACTGGATCTATCACAGAAATGTTTGGAGAATTCCGAACTGGGAAGACCCAGATCTGTCATACGCTAGCTGTCACCTGCCAGCTTCCCATTGACCGGGGTGGAGGTGAAGGAAAGGCCATGTACATTGACACTGAGGGTACCTTTAGGCCAGAACGGCTGCTGGCAGTGGCTGAGAGGTATGGTCTCTCTGGCAGTGATGTCCTGGATAATGTAGCATATGCTCGAGCGTTCAACACAGACCACCAGACCCAGCTCCTTTATCAAGCATCAGCCATGATGGTAGAATCTAGGTATGCACTGCTTATTGTAGACAGTGCCACCGCCCTTTACAGAACAGACTACTCGGGTCGAGGTGAGCTTTCAGCCAGGCAGATGCACTTGGCCAGGTTTCTGCGGATGCTTCTGCGACTCGCTGATGAGTTTGGTGTAGCAGTGGTAATCACTAATCAGGTGGTAGCTCAAGTGGATGGAGCAGCGATGTTTGCTGCTGATCCCAAAAAACCTATTGGAGGAAAT