文档介绍：血清总蛋白测定（双缩月尿试剂
法）
南方便科大学
生物化学实验报告
姓名：
学号：—
专业年级：
组另I」：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称血清总蛋白测定（双缩脲试剂法）
实验日期 2014-11-21 实验地点第五实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作；
2、熟悉血清总蛋白的临床意义；
3、了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。
二、实验原理
（一）：双缩脲反应
在碱性溶液中,双缩月尿（H2NOC -NH- CONH2）能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色
的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲
（H2N-OC-NH-CO-NH2因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与 Cu2+g生双
缩脲反应，生成紫红色络合物；蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（ -CO-NH-），同
样能在碱性条件下与 Cu2+g生双缩月尿反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸
光度与蛋白质的含量在10〜120g/L范围内有良好的线性关系。
三、材料与方法：
实验材料
样品：大牛血清
试剂：双缩脲试剂、蛋白质标准液（ 70g/L ）、生理盐水（ %）
器材：试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球
设备： 1100 分光光度计、水浴锅
实验步骤
加入物（ml）
B （空白）
S （标准）
U （待测）
大牛血清（1: 10）
-
-

蛋白标准液（1: 10）
-

-
%***化钠溶液

-
-
双缩月尿试剂

/取3支试管，做好标记（B空白对照，S标准液，U为待测大牛血清），按下表操作: \
「，观察各试管颜色
,观察颜色
，置于 1100分光光度计的样品槽内，在波长 540nm
以空白管调零，测S和U管吸的光度。
，将比色杯中的样品回收进试管
四、结果与讨论：
（一）:实验结果
1、实验现象：
a、在实验中首先加入双缩月尿试剂，再依次加入 %***化钠溶液、蛋白质标准液、相应
的大牛血清后溶液没有明显的颜色变化，呈淡蓝色透明状;
b、水浴20分钟之后，B试管试管显淡蓝色；S试管和U试管显浅紫色且S试管的颜色
比U试管的颜色稍深。
2、实验数据：
管号
测定次数
平均吸光度
1 2 3
S

U

3、结果计算：
将大牛血清和蛋白标准液的平均吸光度带入公式：血清总蛋白（ g/L）=（Au/As）X蛋白质
标准液浓度（g/L）,得出结果：血清总蛋白=