文档介绍：脂联素基因去信号肽区原核表达及酶免检测方法研究专业: 微生物学学生: 孙强导师: 王云龙教授主要内容?研究背景?目的及意义?实验技术路线?方法与结果?创新与结论研究背景?脂肪细胞中发现的唯一与肥胖呈负相关性的特异性血浆蛋白。肥胖、冠心病、Ⅱ型糖尿病患者血浆中的脂联素低于正常水平。?编码人脂联素的 apMI 基因定位于染色体 3q27 上,长度为 16kbp ,包含 3个外显子和 2个内含子。?人脂联素由 244 个氨基酸组成,由分泌信号序列、特异序列、胶原重复序列、球状序列等 4个结构域组成,其中球状区(gADPN) 是脂联素生物活性的关键部位。脂联素(adiponectin) 目的及意义?可作为冠心病、糖尿病的辅助诊断依据,并对疾病发生进行有效的预警; ?可作为评价药物在治疗肥胖、冠心病和糖尿病疾病方面的效果; ?进一步研究脂联素作用机制提供方便; ?利用基因工程方法制备脂联素定量检测试剂盒中的标准品,提高了稳定性和生物安全性。本研究建立的血浆脂联素酶免定量检测方法——实验技术路线方法与结果(一) 人脂联素基因去信号肽区的克隆与鉴定方法与结果(一) ?总 RNA 浓度= OD260 ×稀释倍数× 40 μ g/ml ? OD280= , OD260= ? RNA 含量= ×1× 40= μ g/mL ?纯度=OD260/OD280== 人脂肪组织总 RNA 的提取方法与结果(一) 2、 PCR 扩增目的基因(678bp ) Marker DL 2000 ; ; control 3、重组质粒酶切鉴定 marker DL 2 000; 1. BamH Ⅰ+Xho Ⅰ digestion products bp M 1 2 2 000 1 000 750 500 250 100 bp M 1 2 000 1 000 750 500 250 100 重组Δ SADPN 蛋白的诱导表达及纯化方法与结果(二) 方法与结果(二) 1、重组菌 BL21(DE3)/pET41a/ Δ SADPN 诱导表达( ) M..Protein molecule weight Marker ; 1. Normal cell lysates control; 2. cell lysates induced at 25 ℃ for 6 hours; 3. Supernatant of cell lysates induced at 25 ℃ for 6 hours; 4. Precipitation of cell lysates induced at 25 ℃ for 6 hours; KD M 1 2 3 4