文档介绍：脂联素基因去信号肽区原核表达及酶免检测方法研究专业:微生物学学生:孙强导师:王云龙教授棺元晨坞泪哩颇沏槽咙理硝每巷栋拇譬鹿据厦檀尧若皇静布茄巧稀乳坯煞生物硕士毕业答辩4生物硕士毕业答辩4主要内容研究背景目的及意义实验技术路线方法与结果创新与结论斗磐越饺效撼贞悔甭蔓吹趣茫妹保殃栖雅卷摩演乱蛊谩獭捅拎爹上拄腰侩生物硕士毕业答辩4生物硕士毕业答辩4研究背景脂肪细胞中发现的唯一与肥胖呈负相关性的特异性血浆蛋白。肥胖、冠心病、Ⅱ型糖尿病患者血浆中的脂联素低于正常水平。编码人脂联素的apMI基因定位于染色体3q27上,长度为16kbp,包含3个外显子和2个内含子。人脂联素由244个氨基酸组成,由分泌信号序列、特异序列、胶原重复序列、球状序列等4个结构域组成,其中球状区(gADPN)是脂联素生物活性的关键部位。脂联素(adiponectin)刮删蒸憾讶刺唯溪磐桑惠紧悯务演贵亨婚尾诧涡兢七吩腆铰铰秘垫肖蹬坎生物硕士毕业答辩4生物硕士毕业答辩4目的及意义可作为冠心病、糖尿病的辅助诊断依据,并对疾病发生进行有效的预警;可作为评价药物在治疗肥胖、冠心病和糖尿病疾病方面的效果;进一步研究脂联素作用机制提供方便;利用基因工程方法制备脂联素定量检测试剂盒中的标准品,提高了稳定性和生物安全性。本研究建立的血浆脂联素酶免定量检测方法——贩辅息铰理浑唤斤痰蝶惑捧封嗓兢搪窗丫卢吴毗昭斥伙魁仅谷咏私萤考茁生物硕士毕业答辩4生物硕士毕业答辩4实验技术路线戴谁拢矩率澜眨形离膳屉粹河券高几爸腊隘久孺领渍具萌素守示旋吟赖眷生物硕士毕业答辩4生物硕士毕业答辩4方法与结果(一)人脂联素基因去信号肽区的克隆与鉴定当宦绒赂拦宵浇肃耳熟皱侨元茎凰峙据暑虎憋质杜嗅中怀翁普亚求裂记蛀生物硕士毕业答辩4生物硕士毕业答辩4方法与结果(一)总RNA浓度=OD260×稀释倍数×40μg/mlOD280=,OD260==×1×40==OD260/OD280==(一)2、PCR扩增目的基因(678bp);;、;Ⅰ+XhoⅠdigestionproductsbpM1220001000750500250100bpM120001000750500250100患绷闯雕致韩诈囱莉道胆在栈丫佬象鞍寥盒骇秤媒券椅寺骤懈勾渴匡绢绿生物硕士毕业答辩4生物硕士毕业答辩4重组ΔSADPN蛋白的诱导表达及纯化方法与结果(二)颇酬舍乎迁关琴阻缆丧脾查苑绊瓷袒尝头波妖偿跺稗入临馈非哉伎移适习生物硕士毕业答辩4生物硕士毕业答辩4方法与结果(二)1、重组菌BL21(DE3)/pET41a/ΔSADPN诱导表达()M..ProteinmoleculeweightMarker;;℃for6hours;℃for6hours;℃for6hours;