文档介绍：脂联素基因去信号肽区原核表达及酶免检测方法研究脂联素基因去信号肽区原核表达及酶免检测方法研究专业: 微生物学学生: 孙强导师: 王云龙教授主要内容?研究背景?目的及意义?实验技术路线?方法与结果?创新与结论研究背景?脂肪细胞中发现的唯一与肥胖呈负相关性的特异性血浆蛋白。肥胖、冠心病、Ⅱ型糖尿病患者血浆中的脂联素低于正常水平。?编码人脂联素的 apMI 基因定位于染色体 3q27 上,长度为 16kbp ,包含 3个外显子和 2个内含子。?人脂联素由 244 个氨基酸组成,由分泌信号序列、特异序列、胶原重复序列、球状序列等 4个结构域组成,其中球状区(gADPN) 是脂联素生物活性的关键部位。脂联素(adiponectin) 目的及意义?可作为冠心病、糖尿病的辅助诊断依据,并对疾病发生进行有效的预警; ?可作为评价药物在治疗肥胖、冠心病和糖尿病疾病方面的效果; ?进一步研究脂联素作用机制提供方便; ?利用基因工程方法制备脂联素定量检测试剂盒中的标准品,提高了稳定性和生物安全性。本研究建立的血浆脂联素酶免定量检测方法——实验技术路线方法与结果(一) 人脂联素基因去信号肽区的克隆与鉴定方法与结果(一) ?总 RNA 浓度= OD 260×稀释倍数× 40 μ g/ml ? OD 280 = , OD 260 = ? RNA 含量= ×1× 40= μg /mL ?纯度= OD 260 /OD 280= = RNA 的提取方法与结果(一) 2、PCR 扩增目的基因( 678bp ) Marker DL 2000 ; ; control 3、重组质粒酶切鉴定 marker DL 2 000; 1. BamH Ⅰ+Xho Ⅰ digestion products bp M 1 2 2 000 1 000 750 500 250 100 bp M 1 2 000 1 000 750 500 250 100 重组ΔSADPN 蛋白的诱导表达及纯化方法与结果(二) 方法与结果(二) 1、重组菌 BL21(DE3)/pET41a/ Δ SADPN 诱导表达( ) M..Protein molecule weight Marker ; 1. Normal cell lysates control; 2. cell lysates induced at 25 ℃ for 6 hours; 3. Supernatant of cell lysates induced at 25 ℃ for 6 hours; 4. Precipitation of cell lysates induced at 25 ℃ for 6 hours; KD M 1 2 3 4