文档介绍：miR-21在结直肠癌中的表达及与结直肠癌临床病理特征的关系伍怡颖缪世坤卢贞周黎明四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室,四川成都610041 目的观察结直肠癌与癌旁正常组织中miR-21及PTEN蛋白的表达,并探讨两者与结直肠癌临床病例特征的关系及其相关性。方法利用荧光定量PCR方法检测105例结直肠癌手术切除标本及癌旁正常组织中miR-21表达, 及Westernblot方法检测其中16对结直肠癌及癌旁正常组织中PTEN蛋白表达水平。结果与相应癌旁组织比较, miR-21在结直肠癌组织中的表达明显增高(P<),。miR-21表达在结直肠癌TNM早期与中晚期(P<)、高中分化与低分化(P<)、不同浸润程度(P<)、有无淋巴结转移(P<)及癌胚抗原CEA水平高低(P<)间差异有统计学意义。而在不同性别、年龄及肿瘤部位间表达差异无统计学意义(P>)。且miR-21 表达与PTEN蛋白呈负相关(r=-,P<)。结论miR-21在结直肠癌组织中表达上调,且与肿瘤临床分期、分化、局部浸润、淋巴结转移及CEA水平高低有关。其可能作为重要的癌基因参与结直肠癌的发生发展,且与 PTEN的调控有关。结直肠癌;miR-21;PTEN 200 中国药理学会第十一届全国化疗药理学术研讨会论文集Ⅳ期13例。局部浸润程度:T1 1例,T2 15例,T3 34例,T4 55例。有淋巴结转移46例, 无淋巴结转移59例。血清癌胚抗原CEA≤ ng/mL43例,> ng/mL61例。标本离体后置于RNA 样本保存液,液氮速冻后转入一80℃冰箱保存备用。二、主要试剂 RNA提取试剂Trizol为美国Invitrogen公司产品,反转录试剂盒RevertAidTM FirstStrand eDNA Synthesis Kit为美国Fermentas公司产品,Hairpin—itTM miRNA定量检测试剂盒及U6 snRNA qPCR NormalizationKit购于上海吉玛公司,及鼠抗人PTEN单克隆抗体购自美国santa cruz公司。三、方法(一)总RNA提取取约l g冷冻保存的组织标本,用液氮研磨法将组织磨成粉末,加入1 mL Trizol试剂,按说明书提取总RNA。使用分光光度计检测RNA浓度及纯度,所有RNA样品放于-80℃冰箱保存备用。(二)反转录及实时荧光定量PCR cDNA合成按按试剂盒(RevertAidTM FirstStrand cDNA Synthesis Kit)说明进行,各特异性茎环结构的IU引物由定量PCR试剂盒提供。每20¨L反应体系中含l“g总RNA。以第l链cDNA为模板,采用Hairpin-itTM miRNA qPCR Quanfitation Kit 及U6 snRNA qPCR Normalization Kit试剂盒进行实时定量PCR,反应体系为25斗L。反应条件: 95℃预变性:40个循环。以U6作为内参,采用2也Ac‘。其中△A Ct(c。血2广C。u6)癌一(C,。㈣-CtU6)癌旁。(三)Werstem—blot在105对标本中,抽取16对结直肠癌及癌旁正常组织标本,提取