文档介绍：论文指导小组成员王继文教授李亮教授本论文由四川省科技厅应用基础项目(2015JY0110)、四川省教育厅重点项目(13ZA0252)、四川省畜禽育种攻关(201 ) 资助本试验在四川农业大学“畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室"完成万方数据论文独创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名: 年月关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意I四)II农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。口本论文不保密。口本论文保密,在一年解密后适用本授权。(请在以上口内划“√”) 研究生签名:‰咖万方数据摘要遗传效应是决定动物机体抗病力强弱的主要因素之一。有资料表明,地方鸭品种往往比经过系统选育的肉鸭品种表现出更强的抗病力,二者在不同阶段免疫器官的发育也存在差异,免疫相关指标所反映出的抗逆能力也不尽相同。为研究地方鸭和培育鸭品种在抗病力上存在差异的原因,拟以建昌鸭(JCH)和农华肉鸭(PK)为试验对象,构建建昌鸭和农华肉鸭4周龄法氏囊混合组织样(JCF、PKF)的数字基因表达谱(DGE),并进行小RNA测序,获得两品种鸭法氏囊组织中的差异表达基因及 miRNA,采用qRT-PCR技术对筛选出的部分差异表达基因和miRNA进行验证,并将二者进行联合分析,试图找到影响两品种鸭抗病能力的关键基因及关键miRNA, 为鸭的免疫调控机制及抗病育种研究提供参考。试验结果表明: DGE结果中,JCF共获得18870755个reads,经过滤得到18438616个clean reads; PKF共获得14281414个reads,经过滤得到13983876个clean reads。相对于PKF, JCF有95个表达上调基因、100个表达下调基因。通过对差异表达基因的GO(Gene ontology)分析,’发现差异表达基因主要被富集到蛋白代谢、高分子代谢及核糖体组分中;通过差异基因的KEGG(Kyoto Encyclopedia ofGenes and Genomes)分析,发现在剪切体相关通路、RNA转运过程、RNA降解过程、、TNF 信号通路及B细胞受体信号通路等均有差异基因富集。筛选出差异显著的与免疫相关的10个差异表达基因并对其进行qRT-PCR验证。通过检测这些基因在JCF中3、 4、5周龄(W3、W4、W5)时对于PKF相对表达量的变化倍数,发现W3时有7个基因相对表达量的变化趋势与预测结果一致, W4和W5时仅有3个基因的验证结果与预测结果一致。小RNA测序在JCF和PKF中分别获得11496755和11962192个reads,经过滤分别得到8234150和8105240个clean reads。相对于PKF,JCF中总共筛选出23个上调miRNAs、41个下调miRNAs。JCF中预测到的新miRNA有26种,PKF中有27 种。通过对miRNA候选靶基因进行GO分析,靶基因主要在细胞组分被富集,通过 KEGG分析,结果发现在代谢通路有最多的靶基因被富集,其他如癌症信号通路、肠道生成IgA的免疫网络、细胞因子间受体互作及甲型流感等通路中均有显著的靶基因被注释。对筛选出的差异最为显著的10个miRNA进行qRT-PCR验证。通过检测JCF 中差异miRNA对于PKF相对表达量的变化倍数,结果发现W3、W4、W5时均有7 万方数据个及以上的miRNA的变化趋势与预测结果一致。通过对差异表达基因和差异miRNA进行联合分析,发现差异miRNA的表达发生变化时,对应的靶基因的表达均发生显著变化。GO分析结果显示miRNA的靶基因主要富集到代谢过程,KEGG富集分析发现miRNA的靶基因主要富集在核糖体信号通路、内质网蛋白过程及RNA降解过程中。综上所述,建昌鸭和农华肉鸭的法氏囊组织中筛选到195个差异表达基因、64 个差异miRNA,以及差异表达基因和miRNA靶基因在多个分子过程和免疫应答相关信号转导途径如抗原加工与呈递、细胞因子间受体互作及B细胞受体信号等通路是构成两品种鸭法氏囊功能差异的基础。以上研究为进一步揭示鸭的免疫调控机制奠定基础。关键词:鸭,